论文部分内容阅读
本文对家蚕浓核病毒(Bombyx mori Densovirus,BmDNV)(镇江株)的部分核苷酸序列进行了研究,克隆并用大肠杆菌表达了主要结构蛋白基因,试图从分子水平、基因水平对它与山梨株的亲缘关系进行探讨。 一.根据已发表的日本山梨株的序列片段1(VD1)设计了一对引物,克隆了1.5Kb的主要结构蛋白基因(vp),测序并用Dna-Star软件分析了两者的同源性。该片段与山梨株VD1-ORF2的同源性为98.1%,有29处核苷酸发生了突变;推测的氨基酸序列与山梨株的同源性为98.6%,有7个氨基酸发生了替换。该序列已经在GeneBank登录,登录号为AY236978 二.根据已发表的日本山梨株的序列片段2(VD2)在两个开放阅读框(ORFs)之间设计了一对引物,扩增得到了992bp位于两个开放阅读框(ORFs)之间的一个片段,测序并用Dna-Star软件分析了两者的同源性。该片段与BmDNV山梨株相应部分的同源性为98.5%,位于两个开放阅读框(ORFs)之间的序列有缺失或插入突变。 三.在NCBI数据库中用Blast软件在线检索,除家蚕浓核病毒山梨株DNA外,未发现其他同源序列。 四.将病毒的主要结构蛋白基因(vp)插入到表达质粒pET-28a多克隆位点BamH I与EcoR I之间,使其位于诱导型启动子LacZ之后,转化到BL21(DE3)菌株,进行了诱导表达。表达产物在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈现特异的条带,大小约为53KD,与预计的大小大致相近。用Western-blotting检测表达产物,可以与病毒的抗体产生特异的反应,表明其为病毒的结构蛋白基因。 五.上述结果表明,BmDNV镇江株和山梨株一样,病毒的基因组是由两个片段组成,并且两者的核苷酸序列有很高的同源性(高达98%以上),而与其他浓核病毒的核苷酸序列没有同源性,可以认为两者是同种病毒的不同分离株。