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目的动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一种慢性疾病炎症,其发病机制尚未完全阐明。在众多学说中,脂蛋白滞留反应学说广受关注。该学说强调LDL脂蛋白在血管内皮下的沉积是AS发生的始动环节。我们既往的研究表明TNFα可促LDL跨内皮穿胞并促发AS。NLRP3炎症小体是调控IL-1β产生的大分子蛋白复合体,与AS的发生发展关系密切。但是其在TNFα促LDL跨内皮穿胞中的作用尚不清楚。炎症激活的内皮细胞在AS的发病中有重要作用,已有研究证实,激活的内皮细胞参与粥样斑块的形成,是有吸引力的治疗靶点。本论文旨在研究NLRP3在TNFα促LDL跨内皮穿胞中的作用,同时制备靶向炎症激活内皮细胞的脂质体siRNA传递系统并考察其效果。方法(1)在转染NLRP3 siRNA的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中加入TNFα刺激,用蛋白免疫印记法(Western Blot)检测NLRP3、IL-1β、caspase-1等炎症小体相关蛋白的表达,采用体外穿胞模型评估LDL穿胞情况。(2)采用薄膜水化法制备脂质体并连接VCAM-1结合多肽以制备多肽靶向阳离子脂质体(Peptide Targeted Cationic liposome,PCL)作为siRNA的载体,用DLS软件分析其粒径、Zeta电位、分散系数等参数。琼脂糖凝胶法及免疫荧光法检测siRNA-PCL的血清稳定性。免疫荧光法测定siRNA-PCL的体外靶向性。CCK8评估siRNA-PCL与Lipofectamin2000(Lipo2000)毒性。siRNA-PCL处理HUVECs,Western Blot检测NLRP3的表达水平,以评估其体外靶向性沉默效率。结果(1)TNFα能激活NLRP3炎症小体,siRNA沉默NLRP3基因能显著降低TNFα引起的NLRP3炎症小体相关蛋白的表达水平;体外穿胞模型检测发现NLRP3 siRNA能明显抑制TNFα促LDL穿胞的作用。(2)通过对siRNA-PCL粒径、Zeta电位和分散系数等指标的考察,优化了siRNA-PCL的制剂工艺。确定当DOTAP:DOPC的摩尔比为40:35,MAL-DSPE-PEG2000:peptides摩尔比为3:1,脂质体与siRNA的质量比为100:1时,siRNA-PCL系统最为稳定。siRNA-PCL的血清稳定性优于裸siRNA,在含有50%血清的培养基中能有效进入LPS预刺激的内皮细胞。siRNA-PCL的毒性远低于Lipo2000;siRNA-PCL能有效靶向炎症激活的内皮细胞并抑制NLRP3蛋白的表达,抑制TNFα上调NLRP3的作用。结论TNFα能激活NLRP3炎症小体,NLRP3炎症小体的激活参与了TNFα促LDL穿胞的作用;我们制备的VCAM-1结合多肽靶向阳离子脂质体能有效的靶向炎症激活的内皮细胞并抑制NLRP3蛋白的表达,且在血清存在的情况下,能稳定进入细胞,其毒性远低于Lipo2000,有望作为一种有效的siRNA载体在AS治疗中发挥作用。