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[目的]探讨淫羊藿苷(Icariine,ICA)对缺血性神经元的保护作用及其分子机制。 [方法]1、原代培养的胚胎小鼠大脑皮层神经元,分为正常神经元组、氧糖剥夺处理组(OGD组)和淫羊藿苷处理组(ICA组)。除正常组外,其他两组予以氧糖剥夺(OGD)处理制备缺血性脑损伤体外模型,后ICA组再加入不同浓度淫羊藿苷(ICA)(40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml)并维持24小时:(1)以MTT法、流式细胞仪技术分别检测三组神经元存活率及死亡率,评估ICA对OGD神经元的损伤程度的影响;(2)流式细胞仪技术检测可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)干扰(CART siRNA)对经淫羊藿苷处理的OGD神经元死亡率的影响;实时定量PCR(RT-PCR)法及放射免疫法测定三组CART mRNA和蛋白表达;(3) RT-PCR法及放射免疫法测定MAPK/P38、MAPK/JNK和MAPK/ERK抑制剂对淫羊藿苷组CART mRNA和蛋白表达的影响。 2、原代培养的胚胎小鼠大脑皮层神经元,分为正常神经元组(正常组)、OGD处理组(OGD组)、CART处理组(CART组)和生理盐水(NS)对照组。除正常组外,其他三组予以氧糖剥夺(OGD)处理制备缺血性脑损伤体外模型;后CART组和生理盐水对照组再分别加入不同浓度CART55-102(0.2nmol/L、0.4nmol/L、0.8nmol/L)和等体积生理盐水并维持24小时。(1)以MTT法、流式细胞仪技术分别检测四组神经元存活率及死亡率,评估细胞的损伤程度;(2)流式细胞仪技术分别检测各组神经元ROS含量和线粒体膜电位(△Ψm)的变化;RT-PCR法测定各组神经元线粒体DNAmRNA(mtDNA mRNA)表达;比色法检测各组神经元线粒体复合物(ComplexⅠ、Ⅱ、Ⅲ)活性;评估CART抗氧化及对线粒体的保护作用。 [结果]1、(1)与OGD组比较,不同浓度的ICA使OGD神经元活力升高(P<0.05),有效降低OGD神经元的死亡率(P<0.05);并呈剂量依赖性,160μg/ml为最佳剂量;与ICA组比较,CART siRNA使经ICA(160μg/ml)处理的神经元死亡率上升(P<0.05)。(2)与OGD组比较,ICA(160μg/ml)上调OGD神经元CART的蛋白和mRNA表达(均P<0.05)。(3)与ICA(160μg/ml)组比较,ERK抑制剂显著抑制ICA组CART蛋白和mRNA表达(均P<0.05)。 2、(1)与OGD组和生理盐水对照组比较:不同浓度的CART提高OGD神经元存活率(P<0.01-0.05),显著降低OGD神经元的死亡率(均P<0.05);并呈一定的浓度依赖性,以0.4nmol/L为最佳剂量。(2)与OGD组和生理盐水对照组比较:CART降低OGD神经元细胞内ROS水平(均P<0.01);稳定因OGD处理降低的线粒体膜电位(△Ψm)(均P<0.05); CART上调mtDNA mRNA表达(P<0.01和P<0.05),上调神经元线粒体ComplexⅡ活性(均P<0.05);CART组神经元线粒体ComplexⅠ、Ⅲ活性未被上调(均P>0.05)。 [结论](1)ICA通过上调CART表达保护缺血性神经元,其机制与MAPK/ERK通路相关;(2) CART稳定线粒体膜电位,上调mtDNA表达和线粒体ComplexⅡ活力,抑制氧化应激保护缺血性神经元。