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目的:应用细胞克隆形成法,初步比较拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康、伊立替康、羟喜树碱对人鼻咽癌低分化细胞株CNE2的放射增敏作用。
方法:培养鼻咽癌低分化细胞株CNE2。将指数生长期的细胞按1×104个/孔接种到96孔板,用WST法进行拓扑替康、伊立替康、羟喜树碱的细胞毒性检测,得出IC50、IC10。将IC10作为放射增敏的工作浓度。待细胞生长至指数生长期,进行细胞收集、重悬、计数,并按射线照射剂量梯度,在培养皿中加入不同细胞总数的细胞悬液。实验分为正常对照组、单纯照射组、单纯药物组、药物+照射组,其中药物+照射组分为三个亚组:拓扑替康+照射组、伊立替康+照射组、羟喜树碱+照射组。在照射前30分钟分别加入工作浓度的拓扑替康、伊立替康、羟喜树碱,后按不同的照射剂量梯度照射。采用医用直线加速器,照射条件为6 MV X线照射,剂量率为:418.41cGy/min,SSD为100cm,PDD为99.4%,照射野大小为25×25cm。照射后4小时,更换培养基,在37℃、0.5%CO2恒温孵育箱中培养14天,应用计数克隆形成方法,计算细胞存活率,用单击多靶数学模型,使用GraphPadPrism5.0软件进行曲线拟合作图。通过计算N、D0、Dq、SERD0、SERDq、SERSF2,比较单纯照射组和药物+照射组之间,以及各个药物+照射亚组之间的放射增敏作用的强弱。
结果:拓扑替康、伊立替康、羟喜树碱对CNE2细胞的IC50分别为0.28ug/ml、1.43ug/ml、18.78ug/ml;IC10分别为0.08ug/ml、0.56ug/ml、0.68ug/ml。CNE2细胞的克隆形成率为68%。单纯照射组的N值为3.728,D0值为1.187Gy,Dq值为0.678 Gy;拓扑替康+照射组的N值为5.219,D0值为0.560 Gy,Dq值为0.402Gy,SERD0、SERDq、SERSF2分别为2.120、1.687、5.255;伊立替康+照射组的N值为2.906,D0值0.911Gy,Dq值为0.422Gy,SERD0、SERDqSERSF2分别为1.303、1.607、2.00;羟喜树碱+照射组的N值为3.499,D0值为0.746Gy,Dq值为0.406Gy,SERD0、SERDq、SERSF2分别为1.591、1.670、3.012。
结论:研究结果显示,拓扑替康、伊立替康、羟喜树碱在IC10低浓度下对CNE2细胞株均具有放射增敏作用。放射增敏作用强弱依次为拓扑替康最强,羟喜树碱次之,伊立替康最弱。