SVA 3C蛋白促进PRV及其它猪源病毒复制的检测及机制初探

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猪塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)Senecavirus病毒属成员,可导致育肥猪鼻镜及蹄部出现水疱,仔猪急性死亡和腹泻。SVA的基因组编码四个结构蛋白和八个非结构蛋白。其中SVA 3C非结构蛋白在病毒生命周期和病毒与宿主相互作用中起着至关重要的作用,可能是SVA用来破坏宿主先天免疫的关键因子之一。伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)常引起妊娠母猪繁殖功能障碍和初生仔猪出现神经症状,仔猪感染率和死亡率极高,给各国养猪业带来了巨大经济损失。本课题组前期研究发现SVA可以在体内和体外促进PRV的复制,且过表达SVA 3C蛋白可以提高PRV在细胞层面的复制力,为了探究SVA 3C蛋白在优化疫苗方面的潜力,本文主要从以下三个方面展开研究:(1)为了探究SVA 3C蛋白对几种常见猪源病毒(PRV、PEDV、SADS-CoV、PRRSV)复制的影响,在细胞中转染SVA 3C蛋白过表达载体后接种病毒,通过qPCR、Western blot和测定病毒效价的方法检测病毒含量,结果表明在细胞中过表达SVA 3C蛋白能够促进PRV、PEDV、SADS-CoV和PRRSV在细胞中的复制。(2)PRV含有多个可供外源基因插入或替代的复制非必需基因,因此,PRV基因缺失疫苗株是重组疫苗的理想载体。为了探究SVA 3C蛋白对PRV载体病毒复制以及外源基因表达的影响,在细胞中转染SVA 3C蛋白过表达载体后接种PRV载体病毒,通过qPCR和测定病毒效价的方法检测病毒含量,并通过qPCR和Western blot检测外源基因表达情况,结果表明SVA 3C蛋白可以促进PRV载体病毒复制以及外源基因的表达。(3)选用PK-15细胞作为模型,探究SVA 3C蛋白对细胞凋亡、焦亡以及自噬的影响,结果表明过表达SVA 3C蛋白会激活Caspase-3进而触发细胞凋亡,但不会诱导细胞焦亡,可以抑制细胞自噬标志因子Beclin1在mRNA水平的表达。综上所述,SVA 3C蛋白可以通过触发细胞凋亡和抑制细胞自噬来促进PRV、PEDV、SADS-CoV、PRRSV以及PRV载体病毒的复制,并促进载体病毒上插入的外源基因的表达。SVA 3C蛋白可进一步应用于培养临床样品中难以分离培养的病毒以及提高生产实践中病毒的产量,优化相关基因工程活疫苗以及活病毒疫苗载体的构建策略,提高载体疫苗免疫活性。
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