Fat-1转基因牛的基础性研究

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ω-3PUFAs对人类及其他哺乳动物的健康极其重要,富含ω-3PUFAs可以调节许多基因的表达进而影响细胞的增值、生长、凋亡以及细胞信号转导,上述这些作用对动脉粥硬化、高血压、冠心病、精神疾病与各种癌症有重要影响。但是人类与哺乳动物不能在体内合成ω-3PUFAs,需由食物中摄取来满足需要。Fat-1基因编码ω-3PUFAs脱氢酶,它是ω-3PUFAs合成的关键基因,可以将ω-6PUFAs转化为ω-3PUFAs,从而提高机体内ω-3PUFAs的含量。本实验通过动物转基因技术将fat-1基因转入牛的塞因组中,利用动物克隆技术产生ω-3PUFAs的转基因牛。对转基因牛中外源基因拷贝数的检测和对牛基因组表达影响的研究对认识fat-1转基因牛有重要意义。本实验主要利用Real-time PCR技术与芯片技术分别检测了外源基因的拷贝数和对牛基因组的影响。本试验得到的结果如下:1.转基因阳性牛的检测本实验首先用PCR法对两头转基因牛进行初步检测,然后再采用Southern杂交技术做进一步的鉴定,结果显示两种方法得到了一致的结果,证明两头转基因牛是阳性牛,可以进行后续试验。2.转基因拷贝数的检测本实验采用绝对定量PCR法检测外源基因拷贝数。标准曲线为:Log2N=-3.16Ct+40.76(R2=0.9942),两头转基因牛中外源基因拷贝数分别为4.62±1.03,5.46±1.26。3.外源基因对全基因组表达的影响本实验采用基因表达谱芯片,将转基因样本与野生型对照组进行荧光分子标记,然后同时与芯片进行杂交,通过分析两组样品与探针杂交的荧光强度的比值,来检测基因表达水平的变化。结果显示Fat-1转基因牛与野生型牛共有43653个差异基因,本试验选取p-value≤0.05and fc≥1的差异基因进行分析,结果表明多不饱和脂肪酸成分的改变影响基因的表达,并通过不同的机制影响生理活性和病理学过程。
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