研究背景与目的: 横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma，RMS)为常见的软组织肿瘤之一，来源于未成熟的间叶细胞，国外报道占成人恶性肿瘤的1％以下，在儿童恶性肿瘤中占约4～6％。通过手术、化疗、放疗等现代综合治疗模式，儿童患者5年总生存率可以达到60～70％，成人预后明显差于儿童，5年生存率20～40％之间，大约40～60％患者最终复发死亡。寻找横纹肌肉瘤分子生物学标记物作为疾病诊断和预后分子靶标，探讨新的分子生物学治疗方法有可能改善横纹肌肉瘤患者的生存率。大量实验已证实，蛋白磷酸化在细胞的信号转导中起到重要作用，对正常细胞的分化、生长均有影响，在恶性肿瘤中磷酸化蛋白也被证实存在过度表达，从而导致肿瘤的过度生长。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin．mTOR)是信号传导过程重要蛋白，mTOR信号传导通路活化可以抑制多种刺激诱发的细胞凋亡，促进细胞周期进展，从而促进细胞的生存和增殖，同时参与血管形成，在肿瘤的形成和发展中扮演非常重要的角色，并参与肿瘤的侵袭和转移。肿瘤组织乏氧是恶性肿瘤的重要生物学特征，乏氧细胞在实体瘤中是常见现象，而HIF-1α在缺氧诱导的基因表达中起关键作用，目前的研究表明，在缺氧时调节VEGF的信号传导途径中，HIF-1起中枢纽带作用，它的功能不仅使VEGF的mRNA稳定性增加，而且能增加VEGF的转录活性，而VEGF在肿瘤血管形成中起关键作用。最近研究显示，mTOR信号传导通路蛋白可以在转录水平上调节HIF-1α的合成，使其进入细胞核后诱导VEGF的表达，在多种恶性肿瘤的体外实验研究中得到证实。p—mTOR/p—4EBP1/HIF-1α/VEGF四种蛋白在横纹肌肉瘤组织中的联合检测国内外尚无报道。本研究旨在收集70例横纹肌肉瘤组织及临床资料，通过免疫组化检测横纹肌肉瘤组织中p—mTOR/p—4EBP1/HIF-1α/VEGF四种蛋白的表达情况，探讨其与横纹肌肉瘤患者的临床特点和预后关系，寻找横纹肌肉瘤新的预后因素和分子靶向治疗的依据。 研究材料和方法: 收集2000年1月至2008年7月中山大学肿瘤防治中心收治的、经病理学证实的70例横纹肌肉瘤患者的临床资料及组织标本，同时收集5例正常横纹肌组织做研究对照。采用链霉亲和素一生物素辣根过氧化物复合物法(StreptAvidinBiotinComplex，SABC)法检测组织中蛋白表达情况。观察p—mTOR、p—4EBP1、HIF-1α、VEGF四种蛋白在横纹肌肉瘤组织和正常横纹肌组织中的表达水平，并分析四种蛋白与横纹肌肉瘤患者临床特点的关系及其对预后的影响。应用SPSS16.0forwindows统计软件进行统计分析。 研究结果: 1、横纹肌肉瘤组织中p—mTOR蛋白阳性表达率为75.7％(53/70)，p—4EBP1蛋白阳性表达率为65.7％(46/70)，HIF-1α蛋白阳性表达率为75.7％(53/70)，VEGF蛋白阳性表达率为72.9％(51/70)，5例正常横纹肌组织p—mTOR、p—4EBP1、HIF-1α、VEGF蛋白表达均阴性。p—mTOR、p—4EBP1、HF-1α和VEGF蛋白在横纹肌肉瘤中的表达呈正相关(P<0.05)。 2、p—mTOR蛋白表达与横纹肌肉瘤患者的病理亚型的相关性有统计学意义(P<0.05)，腺泡型横纹肌肉瘤组织中p—mTOR蛋白阳性表达率明显高于胚胎型和多形型横纹肌肉瘤的阳性表达率。p—mTOR蛋白表达与性别、年龄、肿瘤大小、分期、淋巴结转移等的相关性均无统计学意义(P>0.05)。p—mTOR蛋白阴性组与阳性组患者3年总生存率分别为80.0％±10.3％及22.6％±7.9％(P=0.001)，3年无疾病进展生存率分别为66.5％±14.0％和14.9％±7.3％(P=0.014)。 3、p—4EBP1蛋白表达与横纹肌肉瘤患者的肿瘤大小的相关性有统计学意义(P<0.05)，在直径>5cm的肿瘤组织中p—4EBP1蛋白阳性表达率明显高于直径≤5cm的肿瘤组织的阳性表达率。p—4EBP1蛋白表达与性别、年龄、分期、淋巴结转移等相关性均无统计学意义(P>0.05)。p—4EBP1蛋白阴性组与阳性组患者的3年总生存率分别为63.0％±11.3％及27.9％±8.6％(P=0.017)，3年无疾病进展生存率分别为44.5％±13.7％和14.9％±7.3％(P=0.052)。 4、HIF-1α蛋白表达与横纹肌肉瘤患者的性别、肿瘤大小、分期的相关性有统计学意义(P<0.05)，在女性、肿瘤直径>5cm和Ⅲ+Ⅳ患者肿瘤组织中的HIF-1α蛋白阳性表达率高于男性、肿瘤直径≤5cm和Ⅰ+Ⅱ患者肿瘤组织的阳性表达率。HIF-1α蛋白表达与年龄、病理类型、淋巴结转移的相关性均无统计学意义(P>0.05)。HIF-1α蛋白阴性组与阳性组患者的3年总生存率分别为54.5％±12.8％及38.0％±8.2％(P=0.045)，3年无疾病进展生存率分别36.7％±14.6％和29.4％±9.1％(P=0.092)。 5、VEGF蛋白表达与横纹肌肉瘤患者的分期的相关性有统计学意义(P<0.05)，Ⅲ+Ⅳ患者肿瘤组织中的VEGF蛋白阳性表达率高于Ⅰ+Ⅱ患者肿瘤组织的阳性表达率。VEGF蛋白表达与年龄、性别、肿瘤大小，病理类型、淋巴结转移的相关性均无统计学意义(P>0.05)。VEGF蛋白阴性组与阳性组患者的3年总生存率分别为68.1％±13.5％及31.1％±7.7％(P=0.011)，3年无疾病进展生存率分别51.1％±18.9％和20.3％±7.6％(P=0.040). 6、单因素分析显示，p—mTOR(P=0.001)、p—4EBP1(P=0.017)、HIF-1α(P=0.045)、VEGF(P=0.011)、分期(P=0.004)、病理类型(P=0.009)、肿瘤大小(P=0.00003)是不良预后因素，而淋巴结转移情况(P=0.834)、性别(P=0.811)、年龄(P=0.689)与预后无关。 7、多因素分析显示，p—mTOR、VEGF、分期、肿瘤大小是横纹肌肉瘤的独立不良预后因素(P=0.002、0.005、0.004、0.0001)，而HIF-1α、p—4EBP1、病理亚型尚不能作为横纹肌肉瘤的独立不良预后因素(P=0.845、0.163、0.084)。 研究结论: 1.p—mTOR、p4EBP1、HIF-1α、VEGF蛋白在横纹肌肉瘤组织中均存在高表达，且p—mTOR、p—4EBP1、HIF-1α和VEGF蛋白在横纹肌肉瘤中的表达呈正相关。 2.p—mTOR蛋白表达与横纹肌肉瘤患者的病理亚型相关，腺泡型横纹肌肉瘤组织中p—mTOR蛋白阳性表达率明显高于胚胎型和多形型肿瘤组织阳性表达率。p—mTOR蛋白阴性组3年总生存率和无疾病进展生存率均高于阳性组。 3、p—4EBP1蛋白表达与横纹肌肉瘤患者的肿瘤大小相关，直径>5cm的肿瘤组织p—4EBP1蛋白阳性表达率明显高于直径≤5cm的肿瘤组织的阳性表达率。p—4EBP1蛋白阴性组3年总生存率高于阳性组。 4、HIF-1α表达与横纹肌肉瘤患者的性别、肿瘤大小、分期相关，女性、肿瘤直径>5cm和Ⅲ+Ⅳ患者肿瘤组织中的HIF-1α蛋白阳性表达率高于男性、肿瘤直径≤5cm和Ⅰ+Ⅱ患者肿瘤组织的阳性表达率。HIF-1α蛋白阴性组3年总生存率高于阳性组。 5、VEGF蛋白表达与横纹肌肉瘤患者的临床分期相关，Ⅲ+Ⅳ患者肿瘤组织中的阳性表达率高于Ⅰ+Ⅱ患者肿瘤组织的阳性表达率。VEGF蛋白阴性组3年总生存率和无疾病进展生存率均高于阳性组。 6.单因素分析，p—mTOR、p—4EBP1、HIF-1α、VEGF、分期、病理类型、肿瘤大小是横纹肌肉瘤患者的不良预后因素。而多因素分析显示，仅p—mTOR、VEGF、分期、肿瘤大小是横纹肌肉瘤患者的独立不良预后因素。