祛白颗粒质量标准优化及其对白癜风小鼠模型IL-6表达的影响

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目的:多方法联合运用优化祛白颗粒的质量标准;运用网络药理学的方法来筛选祛白颗粒治疗白癜风的药效物质和作用靶点,并探索其作用机制;研究祛白颗粒对白癜风小鼠模型IL-6表达的影响。方法:1.通过薄层色谱法对祛白颗粒中的君药蒺藜和钩藤进行定性鉴别;利用高效液相色谱法测定祛白颗粒中6种有效成分的含量;同时指纹图谱来考察祛白颗粒不同批次间的差异。2.利用TCMSP数据库以及查阅相关文献查询到祛白颗粒中9味药的化学成分,再根据ADME值筛选出祛白颗粒的活性成分并且搜集其靶点,通过5个疾病靶点数据库搜集白癜风疾病靶点,使用STRING构建蛋白质间的相互作用网络,下一步利用DAVID数据库进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,使用Cytoscape构建祛白颗粒成分-靶点-作用通路网络,最后利用分子对接技术来验证相关预测。3.使用氢醌诱导建立C57BL/6小鼠白癜风模型,造模成功后给予不同剂量祛白颗粒给药干预,灌胃40天后取造模处皮肤,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠皮肤状态;摘眼球取血后离心得血清,使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)含量。结果:1.薄层鉴别结果表明蒺藜和钩藤斑点清晰,与对照药材在相应的位置显相同颜色的斑点,且阴性无干扰;建立了10个批次祛白颗粒HPLC指纹图谱,相似度均>0.95,并确认12个共有锋,根据对照品指认出7个色谱峰,分别是没食子酸、没食子酸甲酯、芍药苷、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、丹酚酸B、丹皮酚、大黄素(分别对应1、2、3、4、7、11、12号峰);含量测定显示,没食子酸、没食子酸甲酯、芍药苷、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、丹酚酸B和丹皮酚这6种成分线性关系良好(r≥0.9992),含量测定结果分别为5.845-6.926、1.265-1.460、12.132-13.085、1.693-2.282、2.408-3.086、0.176-0.314mg/g。2.网络药理学研究结果表明祛白颗粒治疗白癜风的主要成分有槲皮素、豆甾醇、山奈酚、豆甾醇、木犀草素和芍药苷等52种,核心靶点有RXRA、MAOA、MAOB、ESR1、IL6、TNF等23个。GO和KEGG富集结果显示,祛白颗粒治疗白癜风主要涉及到的生物过程包括对脂多糖的反应、一氧化氮生物合成过程的正调控和正向调控序列特异性DNA结合转录因子活性等,主要作用通路有色氨酸代谢信号通路、酪氨酸代谢信号通路、药物代谢-细胞色素P450通路和TNF信号通路等。3.通过病理切片可看出正常对照组小鼠表皮无增生,模型对照组小鼠表皮增生明显,祛白颗粒低、中、高剂量组小鼠表皮增生程度相对于模型组均有改善;ELISA实验结果表明不同给药剂量的祛白颗粒均能减少IL-6产生(P<0.01)。结论:君药的薄层鉴别和HPLC指纹图谱联合多种有效成分含量测定的方法适用于祛白颗粒的质量控制与评价;网络药理学研究初步揭示了祛白颗粒对白癜风的治疗作用有多成分、多靶点、多通路的特点;不同给药剂量的祛白颗粒均能降低白癜风小鼠体内白细胞介素-6(IL-6)的含量,且与剂量呈负相关;同时能够抑制白癜风小鼠的表皮增生。
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