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建立了快速测定三角褐指藻细胞内脂质的尼罗红荧光检测方法,以15%的二甲基亚砜(DMSO)为渗透剂,渗透温度35℃,尼罗红染料用量为15μL,染色时间为5min,藻细胞密度为OD500=0.5时染色效果最好。
三角褐指藻能够利用葡萄糖、淀粉、乙酸钠进行兼养生长,各种碳源的加入均有效提高了油脂的含量。低浓度的葡萄糖(0.5 g/L~1.0 g/L)能显著促进藻的生长,最高的细胞干重和油脂含量分别为0.92g/L和45.84%,分别是自养的1.53倍和2.64倍;淀粉对藻的生长没有明显的促进作用;0.5 g/L的乙酸钠对藻的生长和生物量的积累有显著的促进作用,三角褐指藻在兼养培养时SFAs和MUFAs占总脂肪酸的比例提高。
考察了硝酸钠、氯化铵、尿素三种氮源及其浓度对三角褐指藻生长和脂肪含量的影响,氮缺乏时三角褐指藻生长显著受抑,但表现出油脂积累的特性,氮源的种类和浓度对脂肪的含量影响不大;在1.0 mmol/L~8.0 mmol/L时,硝酸钠显著促进藻生长,氯化铵和尿素浓度在2.1 mmol/L以下时,三角褐指藻的比生长速率增加,浓度的继续增加反而抑制了藻的生长;三角褐指藻的细胞干重在尿素浓度为2.1 mmol/达到最高(0.637g/L);氮源的种类及其浓度对藻的脂肪酸组成有较明显的影响。
不同碳氮比的实验结果表明,三角褐指藻对葡萄糖的利用率随着氮浓度的增加而降低,对氯化铵的利用率随着葡萄糖浓度的增加而降低,在低氮浓度和低糖浓度时,藻对葡萄糖和氯化铵的利用率提高;培养基中葡萄糖(g/L)/氯化铵(mmol/L)为0.5/1.0时,三角褐指藻干重达到1.23 g/L,脂肪含量高达44.56%。在相同碳浓度下,脂肪酸组成随氮浓度变化而变化。
为了减少培养的成本,考查了叉培养基中添加乙酸钠和尿素的兼养培养方式对三角褐指藻生长和脂肪积累的影响。结果表明,在乙酸钠浓度为5.0 g/L时得到1.28 g/L的最大生物量,比对照提高了70%;而油脂含量在乙酸钠浓度为0.5 g/L时达到最大(28.90%),比对照提高了90%;培养基中添加尿素可以显著增加三角褐指藻的生长速率,但对油脂含量没有显著影响;在培养基成分相同的条件下,流加培养比分批培养能收获更多的生物量。