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目的:通过整合传统与现代的多学科研究方法,对化橘红饮片进行分级研究,构建操作性强、质量可控的中药饮片序贯分级评价新方法。方法:(1)理论分析与网络预测:①通过查阅化橘红的相关古籍、检索“PubMed”“ScienceDirect”“中国知网”等各大数据库,梳理化橘红的历史源流与现代研究,总结化橘红的传统鉴别经验与现代研究前沿;②通过检索中药成分靶点数据库TCMSP、TCMID、BATMAN-TCM,结合各大期刊数据库已发表文献,筛选化橘红的主要化学成分。利用TCMSP、Stitch、SwissTargetPrediction等平台预测以上化学成分的潜在作用靶点和潜在作用疾病,并再次筛选化橘红治疗特定疾病的关键作用靶点和作用通路。通过网络预测得到化橘红的潜在药效成分和关键的生物学效应指标。(2)等级量化与等级标准制定:①搜集不同产地的45批化橘红饮片,采用分析仪器对化橘红饮片厚度、粉末色度进行定量分析,运用传统性状辨识方法对化橘红饮片的茸毛疏密度和质地进行定性分析,选用《中国药典》(2015版)方法对各批次化橘红饮片的粉末显微特征、薄层特征、水分含量、灰分含量、浸出物含量(水溶和醇溶)、指纹图谱、含量测定等检测项进行定性与定量分析。通过数据分析,形成化橘红饮片的分级量表。②结合化橘红饮片分级量表,在现行国家与地方标准的基础上,制定《化橘红饮片等级标准(草案)》。(3)药效验证实验研究:采用气管滴注博来霉素法,建立肺纤维化大鼠模型,以肺纤维化慢性炎症反应为研究切入点,对不同等级化橘红饮片的药效作用进行评价。从大鼠体重、体温、呼吸频率等方面评价不同等级化橘红对肺纤维化大鼠机体层面的改善情况。从大鼠肺组织的HE染色病理切片、天狼星红染色病理切片、胶原蛋白比例、HYP含量等组织层面评价不同等级化橘红对肺纤维化疾病的治疗作用。在细胞因子层面,考察不同等级化橘红饮片对肺纤维化大鼠的白细胞介素因子IL-6和IL-8、关键趋化因子MCP-1和MIP-1α、促炎TNF-α和促纤维化因子TGF-β1表达量的影响,进而评价不同等级化橘红饮片的生物学效应差异。结果:(1)理论分析与网络预测:①通过古籍和现代研究文献的梳理可知,化橘红具有鲜明的道地优势、品种优势和幼果优势,其现代研究多集中于抗炎、免疫调节两个方面。②化橘红的网络药理学研究共汇集化橘红的29个主要化学成分,预测到316个作用靶点。进一步网络拓扑参数优化筛选出化橘红的22个潜在作用靶点,关联其20个化学成分,并预测到17类潜在作用疾病。结合化橘红化学成分的含量和潜在靶点关联数,选取了柚皮苷和野漆树苷作为化橘红的药效质量指标性成分。化橘红治疗肺纤维化的网络药理学结果表明,化橘红治疗肺纤维化的关键作用靶点有21个、直接作用靶点有24个、关键的直接作用靶点有6个,化橘红治疗肺纤维化主要通过调节MAPK、Toll-样受体信号通路,进而平衡免疫、调节炎性反应、延缓肺纤维化的病理进展。选取了 MAPK与Toll-样受体两个信号通路上化橘红治疗肺纤维化的关键作用靶点,作为化橘红的生物学效应评价指标。(2)等级量化与等级标准制定:①化橘红性状与理化指标检测实验表明,化橘红在性状指标茸毛疏密度、饮片厚度、质地、颜色等检测数据上均表现出明显的等级差异,根据以上性状的实验数据可以区分化橘红饮片的四个等级,且实验结果与理论研究结果相一致;化橘红在理化检测指标水分含量、指纹图谱相似度、总黄酮含量上表现出明显的等级差异,在灰分、浸出物含量上未表现出明显差异。通过数据分析,形成了可区分化橘红饮片等级的分级量表。②结合化橘红饮片分级量表与化橘红现行的14个药材与饮片质量标准,制定了《化橘红饮片等级标准(草案)》,对不同等级的化橘红饮片实现了质量控制。(3)药效验证实验研究:IPF大鼠实验表明,化橘红饮片治疗组在28天体重上与模型组比较,均有统计学差异(p<0.05),其中化橘红一等品组、二等品组、四等品组差异更为显著(p<0.01);化橘红饮片治疗组在7天、28天体温上与模型组比较,均有统计学差异(p<0.05),其中化橘红二等品组第28天的差异更为显著(p<0.01);化橘红饮片治疗组在第28天呼吸频率上与模型组比较,仅有化橘红一等品饮片治疗组有统计学差异(p<0.05)。HE染色病理片观察结果、天狼星红染色病理片观察结果、大鼠肺组织I、III型胶原比例分析结果、大鼠肺组织HYP含量结果均表明不同等级的化橘红饮片治疗组均可延缓肺纤维化的进展。在细胞因子层面上,对各组大鼠肺组织中IL-6、IL-8、MCP-1、MIP-1α的含量以及血清中TNF-α、TGF-β1的含量进行了对比。实验结果表明,不同等级化橘红饮片治疗组均可不同程度上抑制以上细胞因子的表达。在肺纤维化细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α、TGF-β1调节能力方面,化橘红一等品、二等品之间无明显差异,但与化橘红三等品、四等品之间均存在明显差异,具体表现为化橘红一等品与二等品的药效较优,三等品其次,四等品最弱。在肺纤维化关键炎性趋化因子MCP-1、MIP-1α调节能力方面,化橘红三等品与四等品之间无明显差异,但与一等品、二等品之间存在明显差异,具体表现为化橘红一等品的药效较优,二等品其次,三等品、四等品最弱。结论:结合传统经验与现代技术,可构建化橘红饮片“网络预测→等级量化→药效验证”的序贯性分级评价方法。此方法可实现不同等级化橘红饮片的质量区分、质量控制和药效验证,有利于指导化橘红饮片在市场上的分级生产和流通以及在临床上的分级管理和应用。本研究可为其它中药饮片的分级评价研究提供借鉴。