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背景子痫前期（preeclampsia,PE）作为一种妊娠期高血压疾病,因其发展可能累及全身各系统脏器,严重危及母儿生命健康。子宫螺旋动脉重塑障碍引起的氧化应激和全身免疫炎症激活被认为是PE发病的重要机制。PINK1介导的线粒体自噬可通过吞噬损伤的线粒体,清除聚集的ROS,降低氧化应激损伤以维持线粒体功能和其他生命活动。近年来,细胞焦亡被认为是引起炎症反应的重要机制,Caspase-1是介导焦亡的关键分子,AIM2、NLRC4和NLRP3炎症小体可能在Caspase-1的活化中扮演重要角色,而线粒体释放的ROS是上述炎症小体激活的重要因素之一。因此,本研究推测,PINK1介导的线粒体自噬通过清除损伤的线粒体降低ROS水平,减少各种炎症小体的激活和细胞焦亡的发生,进而在PE中发挥保护作用,目前国内外尚未见相关研究报道。第一部分探究PE中PINK1介导的线粒体自噬目的探究正常孕妇和PE患者胎盘组织中线粒体损伤情况,检测正常孕妇和PE患者胎盘组织中PINK1水平,探讨滋养细胞H/R处理对PINK1及其介导的线粒体自噬的影响,研究PINK1介导的线粒体自噬与PE发病的相关性。方法1.透射电镜比较正常孕妇和PE患者胎盘组织滋养细胞中线粒体自噬情况。2.收集正常孕妇和PE患者胎盘组织各20例,免疫组织化学检测胎盘组织中PINK1的定位,western blotting和real time-PCR检测胎盘组织中PINK1、PRAKIN的表达情况,并比较其在两组胎盘组织中的差异。3.对HTR-8细胞进行H/R处理模拟PE缺血再灌注损伤,western blotting检测对照组和H/R处理组PINK1、PRAKIN表达差异,细胞免疫荧光检测两组线粒体自噬情况,DCFH-DA检测两组ROS水平。结果1.透射电镜下正常组胎盘组织滋养细胞内可见多个线粒体自噬小体,线粒体无肿胀;PE组胎盘组织滋养细胞内未见明显线粒体自噬小体,线粒体肿胀,体积增大,颜色变浅,线粒体嵴模糊不可见。2.两组胎盘组织绒毛滋养细胞和绒毛外滋养细胞均表达PINK1,与正常组比较,PINK1、PRAKIN蛋白及m RNA在PE组孕妇中表达均降低（p＜0.05）。3.与对照组相比,H/R组PINK1、PRAKIN蛋白表达下降,线粒体自噬水平降低,ROS表达明显升高（p＜0.05）。结论PE中PINK1介导的线粒体自噬水平降低,PINK1介导的线粒体自噬不足引起ROS水平升高可能参与PE的发生发展。第二部分探究PE中多种炎症小体介导的滋养细胞焦亡目的比较正常孕妇和PE患者胎盘组织中AIM2、NLRC4、NLRP3炎症小体和焦亡分子Cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-1β、IL-18的表达差异,探究滋养细胞H/R对炎症小体和焦亡分子的影响,研究滋养细胞焦亡在PE发生发展中的作用。方法1.收集正常孕妇和PE患者胎盘组织各20例,免疫组织荧光分别检测AIM2、NLRC4、NLRP3与焦亡执行蛋白GSDMD的共定位情况,观察炎症小体与焦亡分子的关系,并分别比较其在PE组和正常组胎盘组织中的差异。2.Western blotting和real time-PCR检测两组胎盘组织中AIM2、NLRC4、NLRP3炎症小体和焦亡分子Cleaved-caspase-1、GSDMD-N的表达,real time-PCR检测两组胎盘组织中IL-1β、IL-18的表达,并分别比较其在PE组与正常组胎盘组织中的差异。3.扫描电镜观察H/R-HTR-8细胞焦亡形态。4.Western blotting比较正常组和H/R处理组AIM2、NLRC4、NLRP3炎症小体和焦亡分子Cleaved-caspase-1、GSDMD-N的差异,real time-PCR比较两组细胞IL-1β、IL-18的差异。结果1.AIM2、NLRC4、NLRP3和GSDMD在两组胎盘组织中均有表达且位置基本吻合,与正常组比较,AIM2、NLRC4、NLRP3、GSDMD在PE组表达均升高（p＜0.05）。2.与正常组比较,AIM2、NLRC4、NLRP3、Cleaved-caspase-1和GSDMD-N蛋白及m RNA在PE组胎盘中表达升高（p＜0.05）,IL-1β、IL-18 m RNA在PE组胎盘表达升高（p＜0.05）。3.扫描电镜下H/R组存在细胞焦亡。4.与对照组相比,H/R组AIM2、NLRC4、NLRP3、Cleaved-caspase-1和GSDMD-N蛋白表达均升高,IL-1β、IL-18 m RNA也表达升高（p＜0.05）。结论PE中AIM2、NLRC4、NLRP3炎症小体介导的滋养细胞焦亡水平升高,滋养细胞焦亡可能是PE炎症反应的重要原因。第三部分PINK1介导的线粒体自噬调控滋养细胞焦亡参与PE机制探究目的体外细胞实验探究PINK1介导的线粒体自噬与滋养细胞焦亡的关系,进一步揭示两者在PE发生发展中的作用机制。方法1.分别用PINK1质粒和靶向PINK1的si-RNA转染人HTR-8/Svneo绒毛外滋养细胞,建立过表达和沉默PINK1的滋养细胞模型,再对滋养细胞进行H/R处理,将细胞分为五组:（1）H/R组（未转染细胞,缺氧8h、复氧16h,氧浓度为2%）、（2）空载质粒（Vector）+H/R组（Vector质粒转染48h后,H/R处理24h）、（3）PINK1+H/R组（PINK1质粒转染48h后,H/R处理24h）、（4）si-PINK1+H/R组（si-PINK1转染细胞48h后,H/R处理24h）、（5）阴性对照序列（si-NC）+H/R组（si-NC转染细胞48h后,H/R处理24h）。2.DCFH-DA检测五组细胞ROS水平。3.Western blotting检测五组细胞PINK1及AIM2、NLRC4、NLRP3炎症小体和焦亡分子Cleaved-caspase-1、GSDMD-N的表达水平,real time-PCR检测五组细胞中IL-1β、IL-18的表达水平。结果1.PINK1+H/R组HTR-8细胞ROS水平相较于H/R组和Vector+H/R组降低（p＜0.05）,si-PINK1+H/R组HTR-8细胞ROS水平相较于H/R组和si-NC+H/R组升高（p＜0.05）。2.PINK1+H/R组PINK1蛋白表达水平较H/R组和Vector+H/R组升高（p＜0.05）,而AIM2、NLRC4、NLRP3、Cleaved-caspase-1、GSDMD-N蛋白和IL-1β、IL-18 m RNA表达水平相较于H/R组和Vector+H/R组下调（p＜0.05）;si-PINK1+H/R组PINK1蛋白表达水平较H/R组和si-NC+H/R组降低（p＜0.05）,而AIM2、NLRC4、NLRP3、Cleaved-caspase-1和GSDMD-N蛋白和IL-1β、IL-18 m RNA表达水平相较于H/R组和si-NC+H/R组上调（p＜0.05）。结论PINK1介导的线粒体自噬可通过降低ROS水平抑制AIM2、NLRC4、NLRP3炎症小体的激活进而减少滋养细胞焦亡,而PINK1介导的线粒体自噬不足引起滋养细胞焦亡增加很可能是PE氧化应激和炎症激活的重要机制。