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目的:探讨CD4~+Th17效应性T细胞及相关因子在EAE病程中的动态变化,以及依达拉奉对EAE的保护作用,进一步确立依达拉奉对MS的治疗作用。方法:将175只雌性,6-8周龄,体重在180-220g之间的Wistar大鼠随机分组为:依达拉奉组、EAE模型组和空白对照组。本研究采用脊髓/盐水(W/V)=1:10的小剂量豚鼠全脊髓匀浆(GPSCH)/完全福氏佐剂(CFA)的方法免疫Wistar大鼠制备EAE模型,应用依达拉奉注射液进行干预。空白对照组用生理盐水/CFA免疫动物。依达拉奉组免疫方法与EAE组相同,于免疫当天起给予依达拉奉注射液10mg.kg-1.d-1腹腔内注射至处死,空白对照组和EAE模型组每天给予生理盐水1ml/d大鼠腹腔内注射。观察药物对动物临床表现的影响,参照通用的临床评分标准对大鼠进行神经功能评分。于免疫后第10天各组随机取材,记为发病前组,并于各组发病后第3天(高峰期)和第7天(缓解期)分别随机取材,记为3天组和7天组。将各实验组大鼠按不同时期处死后取脊髓腰膨大部位进行HE染色观察炎症细胞浸润情况,同时进行免疫组织化学染色,观察RORrt阳性细胞的分布并计数,进行比较。用实时荧光定量PCR测定各组各时期大鼠脊髓腰膨大IL-17mRNA、IL-23mRNA、HO-1mRNA含量并进行比较,观察各个时期的动态表达情况。心脏取血用酶联免疫吸附法测定血清中IL-17和IL-6的浓度值并进行比较观察各个时期变化情况。采用SPSS13.0统计软件进行统计分析,发病率用百分数表示,组间比较采用卡方检验,计量资料以均数±标准差(±S)表示,多组计量资料均数的比较应用ANOVA方差分析,组间两两比较采用SNK法,P<0.05差异有统计学意义。当方差不齐(P<0.1)时,用多个独立样本非参数检验。结果:1动物发病情况:依达拉奉组平均发病时间明显低于EAE组,具有统计学意义(P<0.05);依达拉奉发病后第3天组平均评分低于EAE组,具有统计学意义(P<0.05);依达拉奉组发病率低于EAE组,具有统计学意义(P<0.05)。2组织病理学观察:2.1HE染色2.1.1发病前:EAE组和依达拉奉组脊髓组织灰质内已经出现少数单核细胞和淋巴样细胞浸润,未发现血管袖套样改变。2.1.2发病后第3天:EAE组出现明显白质疏松、大量的单核细胞和淋巴样细胞浸润和较多的血管袖套样改变(主要位于脊髓白质和灰质交界),比依达拉奉组病理表现严重。2.1.3发病后第7天:EAE组和依达拉奉组单核细胞和淋巴样细胞减少,血管袖套样改变消失,依达拉奉组减少更明显。2.2RORrt免疫组化染色2.2.1发病前:显示EAE组、依达拉奉组和空白对照组均有阳性细胞存在,但是EAE组阳性细胞平均秩次要明显高于其他两组(P<0.05)。2.2.2发病后第3天:EAE组白质空泡形成、疏松,阳性细胞数平均秩次明显高于空白对照组和依达拉奉组,且具有统计学意义(P<0.05)。2.2.3发病后第7天:EAE组白质空泡和疏松程度较前没有明显的变化,依达拉奉组白质空泡化和疏松化比EAE组程度要轻,阳性细胞平均秩次明显低于EAE组有统计学意义(P<0.05)。2.2.4动态变化:空白对照组各时间点变化不大,没有统计学意义(P>0.05)。EAE组发病第3天与发病前、发病第7天比较,白质空泡明显,白质疏松显著,有较多的阳性细胞的表现。依达拉奉组动态变化与EAE类似,但是各个时间点的表达均低于EAE组,有统计学意义(P<0.05)。3外周血中Th17细胞相关细胞因子(IL-17IL-6)含量及动态变化3.1外周血中IL-17的含量:3.1.1发病前:EAE组外周血中IL-17平均含量较空白对照组和依达拉奉组高,具有统计学意义(P<0.05)。3.1.2发病后第3天:EAE组外周血中IL-17平均含量较空白对照组和依达拉奉组高,具有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉组高于空白对照组,具有统计学意义(P<0.05)。3.1.3发病后第7天:EAE组外周血中IL-17平均含量较空白对照组和依达拉奉组高,具有统计学意义(P<0.05)。3.1.4动态变化:空白对照组各时间点之间的差距不大,没有统计学意义(P>0.05)。EAE组各时间点外周血中IL-17平均含量表达3天组高于7天组,具有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉组各时间点外周血中IL-17平均含量表达3天组高于发病前和7天组,具有统计学意义(P<0.05)。3.2外周血中IL-6的含量:3.2.1发病前:EAE组IL-6的含量较空白对照组和依达拉奉组高,具有统计学意义(P<0.05)。3.2.2发病后第3天:空白对照组、依达拉奉组和EAE组之间没有明显的统计学意义(P>0.05)。3.2.3发病后第7天:空白对照组、EAE组、依达拉奉组外周血中IL-6平均含量,三者之间没有明显的统计学意义(P>0.05)。3.2.4动态变化:空白对照组各时间点之间外周血中IL-6平均含量的差距不大,没有统计学意义(P>0.05)。EAE组发病前高于3天组和7天组,具有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉组各时间点发病前高于7天组,具有统计学意义(P<0.05)。4实时定量PCR4.1IL-23mRNA表达4.1.1发病前: EAE组IL-23mRNA表达较其余两组高,但是没有统计学意义(P>0.05)。4.1.2发病后第3天: EAE组IL-23mRNA表达明显高于空白对照组和依达拉奉组,且具有统计学意义(P<0.05)。4.1.3发病后第7天: EAE组IL-23mRNA表达高于空白对照组和依达拉奉组,但是没有统计学意义(P>0.05)。4.1.4动态表达:空白对照组各时间点IL-23mRNA表达差距不大,且没有统计学意义(P>0.05)。EAE组各时间点IL-23mRNA表达发病第3天组高于发病前和发病第7天组,具有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉组各时间点IL-23mRNA表达发病3天组高于发病前和7天组,具有统计学意义(P<0.05)。4.2IL-17mRNA表达4.2.1发病前:EAE组较空白对照组和依达拉奉组IL-17mRNA表达含量高,具有统计学意义(P<0.05)。4.2.2发病后第3天: EAE组IL-17mRNA表达较空白对照组和依达拉奉组高,具有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉组高于空白对照组,具有统计学意义(P <0.05)。4.2.3发病后第7天: EAE组、依达拉奉组IL-17mRNA表达含量高于空白对照组,具有统计学意义(P<0.05),EAE组与依达拉奉组相比,没有统计学意义(P>0.05)。4.2.4动态变化:空白对照组各时间点之间的差距不大,没有统计学意义(P>0.05)。EAE组各时间点IL-17mRNA表达3天组高于发病前和7天组,具有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉组各时间点IL-17mRNA表达,3天组高于发病前和7天组,具有统计学意义(P<0.05)。4.3HO-1mRNA表达4.3.1发病前:依达拉奉组HO-1mRNA表达高于其余两组,具有统计学意义(P<0.05)。4.3.2发病后第3天:依达拉奉组HO-1mRNA表达高于其余两组,具有统计学意义(P<0.05),EAE组HO-1mRNA表达高于空白对照组,具有统计学意义(P<0.05)。4.3.3发病后第7天:依达拉奉组HO-1mRNA表达高于其余两组,具有统计学意义(P<0.05),EAE组HO-1mRNA表达高于空白对照组,具有统计学意义(P <0.05)。4.3.4动态表达:空白对照组各时间点之间的差距不大,没有统计学意义(P<0.05)。EAE组各时间点HO-1mRNA3天组高于发病前,具有统计学意义(P<0.05),7天组高于3天组,具有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉组各时间点HO-1mRNA表达,3天组高于发病前,具有统计学意义(P<0.05),7天组高于3天组,具有统计学意义(P<0.05)。结论:1依达拉奉明显推迟EAE发病时间,降低临床表现的严重性,降低动物的发病率。2依达拉奉可以降低特异性免疫应答,减少炎症反应。3依达拉奉通过抑制外周血中IL-6浓度进而抑制Th17细胞的发育与分化,减少炎症因子IL-17的含量,从而缓解EAE的发病情况。4在脊髓组织中,依达拉奉上调HO-1mRNA表达,下调IL-17mRNA和IL-23mRNA表达。