百里香酚对LPS诱发的乳腺炎小鼠的保护作用及机制研究

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乳腺炎主要是由各类病原微生物感染引起乳腺组织的炎症反应,其发生除了与病原微生物侵入有关,还与动物机体的自身免疫状态密切相关。适度的炎症反应有利于清除入侵微生物;而当机体反应过度强烈,大量炎症介质蓄积体内,会造成机体自身组织的免疫性损伤。因此,在乳腺炎防治过程中除抗微生物治疗,针对机体的免疫保护策略同样重要,而从调节炎症介质表达、调控炎症相关信号通路的激活等也成为机体免疫研究的热点。百里香酚是一种从百里香、牛至等植物中提取的单萜酚类物质,是我国及欧盟国家批准使用的天然促生长饲料添加剂---牛至油的主要成分之一。百里香酚具有良好的免疫调节、抗炎、抗菌等药理作用,但没有其对乳腺炎症的调节作用的报道。因此,本论文通过构建LPS诱导的小鼠乳腺炎模型,评估百里香酚对乳腺炎症的保护作用,并进一步探讨其作用机制,以期为筛选有效防治乳腺炎的药物提供依据。本研究首先通过建立LPS诱发的小鼠乳腺炎模型,并给予不同剂量的百里香酚处理,依次通过病理组织学切片,ELISA检测炎性细胞因子,MPO检测中性粒细胞的聚集情况等指标,评估百里香酚对乳腺炎性损伤的保护作用。实验结果显示,LPS处理组的乳腺组织MPO值及TNF-α、IL-1β和IL-6等炎性细胞因子表达量显著升高,与对照组差异显著。而不同剂量的百里香酚处理组能够显著降低组织中的炎性细胞浸润和炎性细胞因子的表达,并促进抗炎性细胞因子IL-10的分泌。表明百里香酚对乳腺炎性损伤具有良好的保护作用。为进一步探究其作用机制,通过体外培养小鼠乳腺上皮细胞,并应用MTT法测定百里香酚的对乳腺上皮细胞无毒性的浓度范围。用ELISA法测定不同组别的乳腺上皮细胞分泌TNF-α和IL-6炎性细胞因子的表达情况,用Western blot法检测炎性介质iNOS和COX-2的蛋白表达以及NF-κB和MAPKs(JNK、ERK、p38)相关信号通路蛋白的变化情况。实验结果显示,百里香酚能够显著降低由LPS刺激乳腺上皮细胞产生的TNF-α和IL-6等炎性细胞因子的分泌,抑制iNOS和COX-2的表达,并抑制了LPS诱导的NF-κB和MAPK(sJNK、ERK、p38)信号通路激活。表明百里香酚通过抑制NF-κB和MAPKs信号通路激活,从而降低炎症介质的表达,减轻乳腺上皮细胞的炎性反应。最后,我们研究了百里香酚对体外诱生的主要细胞因子的影响。通过ELISA法测定百里香酚对LPS刺激的小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2及IL-10的影响。实验结果显示,百里香酚在试验浓度范围内促进了抗炎性细胞因子IL-10的分泌,抑制了炎症性细胞因子IL-2的分泌,对IFN-γ的影响不显著。表明百里香酚能够调节细胞因子的表达,促进抗炎性细胞因子的分泌,抑制炎症性细胞因子的分泌,从而纠正细胞因子的失衡。综上所述,本研究通过使用LPS诱发的小鼠乳腺炎模型,证实百里香酚对乳腺炎性损伤具有良好的保护作用,体外实验结果进一步说明百里香酚能够调节炎症介质的表达,通过抑制炎症性细胞因子、炎性介质的表达,促进抗炎性细胞因子的分泌,从而缓解机体向炎症性疾病的发展。并通过抑制NF-κB和MAPKs炎症相关信号通路的激活从而发挥细胞保护作用,为百里香酚应用于乳腺炎的防治提理论基础和实验依据。
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