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研究背景与目的胆管癌是最常见的胆道恶性肿瘤,其临床症状出现较晚,且缺乏有效的非手术治疗方案。胆管癌具有较强的侵袭性,大多数患者在诊断时已经发生了远处转移从而丧失了根治性手术的机会。因此,探究胆管癌细胞发生发展及转移播散的机制对提高胆管癌患者的预后具有重要意义。Musashi2(MSI2)基因的翻译产物是一种翻译调节因子:RNA结合蛋白,它通过与mRNAs结合来调控各种基因的翻译进程。近年来研究发现,MSI2是一种肿瘤相关基因,其在肿瘤组织中表达增高,并且与患者的不良预后相关。目前为止,MSI2在胆管癌中的表达及作用还没有相关的报道。结合MSI2的生物学功能,我们猜想其可能参与了胆管癌的发生发展。在本研究中,我们试图通过实验来检测人类标本中MSI2蛋白的表达情况,分析MSI2的表达与患者临床病理参数之间的联系,并进一步探索MSI2在胆管癌细胞生长和侵袭中的作用。研究方法(1)运用Western Blot与qRT-PCR实验,检测20对新鲜冰冻胆管癌标本与癌旁正常组织中MSI2基因的表达情况,并分析其表达是否具有差异性。(2)运用免疫组化实验,检测78对胆管癌与正常胆管组织石蜡切片中MSI2的表达情况,并结合患者的病理资料,分析MSI2的表达与患者临床病理参数的相关性。(3)运用Western blot实验检测人正常胆管细胞(HIBEpiC)与人胆管癌细胞(QBC939和RBE)中MSI2蛋白的表达情况。通过慢病毒转染的方法来构建稳转细胞系,敲低胆管癌细胞中MSI2的表达。(4)运用克隆形成实验、Cell Counting Kit-8实验、划痕实验和Transwell实验检测MSI2基因对胆管癌细胞增殖迁移侵袭能力的影响。(5)运用Western blot与免疫组化实验检测MSI2基因对胆管癌上皮间质转化(EMT)进程相关表型分子的调控作用实验结果(1)与正常胆管组织相比,胆管癌组织中MSI2在mRNA及蛋白质水平的表达明显增高,并且MSI2的表达与胆管癌的TNM分期、淋巴结转移及患者的预后相关。(2)胆管上皮细胞HIBEpiC中MSI2的蛋白质表达水平明显低于胆管癌细胞QBC939及RBE,并且QBC939的表达高于RBE。与未转染的胆管癌细胞系相比,敲低MSI2的表达可以降低胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。(3)胆管癌细胞中MSI2基因可以调控E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白质的表达,MSI2参与了胆管癌细胞的EMT进程。研究结论我们的研究结果表明,MSI2基因的高表达是胆管癌患者不良预后的独立危险因子,下调胆管癌细胞中MSI2蛋白的表达可以抑制胆管癌细胞的增殖迁移及侵袭能力。MSI2可能通过参与胆管癌细胞的EMT进程来影响胆管癌的迁移侵袭。