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[目的]:
口腔正畸治疗是通过矫治力控制牙齿在牙周组织内移动并影响颌骨生长发育来矫治错殆畸形。快速、有序的牙周组织修复及改建对加速正畸牙移动有重要意义。人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPLFs)是牙周膜中最重要的功能细胞,是一类具有多种不同功能和分化潜能的细胞,其主要功能为分泌胶原和基质,并产生或分泌多种细胞因子,触发细胞内外信号传导网络,参与正畸牙移动过程中牙周组织的细胞应答、牙周组织修复及再生过程。结缔组织生长因子(connective tissue growth facfor,CTGF)在胚胎发育、骨折愈合、细胞增殖和分化、血管形成、肿瘤发生等众多领域都有着重要的作用。研究发现,CTGF可有效促进成纤维细胞、内皮细胞、破骨细胞及成骨细胞增殖,并上调VEGF表达,诱导血管生成。本课题对CTGF在正畸牙周组织改建中的作用及机制进行探索研究。
[实验方法]:
体外实验:通过组织培养获得HPLFs,免疫组化鉴定;取第5代HPLFs,接种细胞并制作细胞爬片,加入CTGF(5,10,50,100 ng/mL),细胞培养48h。MTT法及流式细胞仪检测CTGF体外对HPL,Fs细胞增殖及细胞增殖周期的影响;免疫组化及计算机图像分析仪检测CTGF体外对HPLFs中VEGF表达的影响。体内实验:建立大鼠正畸牙移动模型,分别于加力后不同时段,获得组织标本,HE染色、免疫组化及计算机图像分析仪观察加力组及对照组牙周组织学改变及VEGF表达的变化;在加力移动的下颌第一前磨牙舌侧近远中根之间粘膜下注射CTGF(实验组)及生理盐水(对照组),分别于CTGF干预后不同时段,获得组织标本,HE染色、免疫组化检测及计算机图像分析仪观察牙周组织学改变及VEGF表达的变化。
[实验结果]:通过组织培养获得原代HPLFs并传代培养,免疫组化检测细胞抗波型丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性。MTT检测显示,CTGF(5-100 ng/ml)致OD值升高,最佳浓度为10 ng/ml。流式细胞仪结果显示:CTGF终浓度为5-100ng/ml时,实验组增殖指数、S期细胞均较对照组增高,其中10 ng/ml组增幅最大。CTGF(5-100 ng/ml)作用后,HPLFs中VEGF表达较对照组增高,10 ng/ml组增幅最大。成功建立大鼠正畸牙移动模型,实验全过程矫治器脱落率为2.2%。正畸加力后,大鼠牙周组织中伴随牙周组织改建VEGF表达增高。加力7d组,牙周组织改建最为活跃,为VEGF表达高峰期。大鼠正畸牙移动模型牙周注射CTGF可加速正畸大鼠牙周组织改建。CTGF干预后7d组VEGF表达强度增幅最高,注射组与对照组有显著差异。
[实验结论]:
本研究成功获得人牙周膜成纤维细胞;建立大鼠正畸牙移动模型;正畸加力过程中大鼠牙周组织VEGF表达随加力时间不同有所变化。研究证实CTGF体外促进HPLFs增殖、并上调VEGF表达;大鼠正畸牙移动模型牙周注射CTGF可有效上调VEGF表达,加速正畸牙周组织改建。