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第一部分VSL#3及布拉氏酵母菌对急性结肠炎模型小鼠肠道菌群的影响目的探讨益生菌(VSL#3、布拉氏酵母菌)对急性结肠炎模型小鼠肠道菌群的影响。方法C57BL/6小鼠分为4组,除空白对照组外,其余3组小鼠饮用2.5%的DSS 5天建模,DSS建模组饮用水灌胃,其余2组分别予VSL#3、布拉氏酵母菌灌胃,建模结束后2天处死各组小鼠。收集灌胃前(第0天)、实验中期(第4天)及灌胃结束(第7天)的粪便标本及处死后的肠黏膜组织,送检16srDNA基因测序并统计分析。结果VSL#3组与DSS建模组比较,疾病活动度(DAI)及组织学病理评分下降,布拉氏酵母菌灌胃组没有显著变化。粪便菌群:实验中期,DSS建模组、VSL#3组及布拉酵母菌组小鼠粪便菌群多样性均低于空白对照组(p=0.0135,p=0.0018,p=0.0151)。灌胃结束后,VSL#3组多样性低于空白对照组(P=0.025),其余两两组间比较差异无统计学意义。肠黏膜菌群:DSS建模组、布拉氏酵母菌组多样性低于空白对照组(p=0.031,p=0.0437),VSL#3组多样性高于DSS建模组及布拉氏酵母菌组p=0.0394,p=0.0426)。DSS建模组与空白对照组比较,实验中期、灌胃结束后的粪便菌群和黏膜菌群均拟杆菌属增加,乳杆菌属减少。实验中期小鼠粪便菌群中,DSS建模组较空白对照组厚壁菌门Turicibacter属、拟杆菌门Odoribacter属显著增多,而VSL#3灌胃组较DSS建模组两者丰度显著减少。结论VSL#3对DSS诱导的小鼠急性结肠炎有较明显的缓解作用,VSL#3及布拉氏酵母菌均可影响肠道菌群。与正常小鼠相比,结肠炎建模小鼠粪便菌群及黏膜菌群多样性降低。VSL#3增加黏膜菌群多样性,但不增加粪便菌群多样性。急性结肠炎模型小鼠中Turicibacter、Odoribacter菌属增多,这些菌属可被VSL#3抑制。第二部分法尼酯X受体在VSL#3改善小鼠结肠炎症及抑制结肠成瘤中的作用初探目的探究急性结肠炎模型小鼠中VSL#3是否影响法尼酯X受体(FXR)表达及VSL#3是否通过FXR抑制炎癌模型小鼠结肠成瘤。方法20只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、VSL#3组、建模对照组、建模+VSL#3组,建模小鼠饮用2.5%的DSS 5天建立急性结肠炎模型,VSL#3组及建模+VSL#3组予1.5×109 CFU/d VSL#3灌胃。建模结束2天后处死小鼠,qPCR测定小鼠结肠FXR mRNA表达水平,Western blot测定结肠核蛋白中FXR表达量。构建FXR敲除小鼠并进行FXR表达验证。15只WT小鼠及15只FXR敲除小鼠均随机分为3组:空白对照组,建模组及VSL#3组。除2个空白对照组外,其余4组通过腹腔注射AOM及1轮2.5%DSS诱导建立结肠炎癌变模型。VSL#3组予1.5×109 CFU/d VSL#3灌胃,空白组及建模组予饮用水灌胃。12周后处死小鼠,计算结肠瘤负荷。检测结肠TNFα、IL-6及IL-1βmRNA水平变化。结果急性结肠炎模型中:空白对照组、建模对照组及建模+VSL#3组小鼠结肠FXR在转录水平无显著差异。但建模对照组小鼠结肠核蛋白中的FXR较空白对照组明显降低,建模+VSL#3组小鼠结肠核蛋白中FXR表达量较建模对照组升高,VSL#3组小鼠结肠核蛋白FXR表达量与空白对照组无明显差异。炎癌模型中:VSL#3对WT小鼠结肠成瘤可能有抑制作用(p=0.0546),但对FXR敲除鼠结肠成瘤抑制作用不明显。在WT小鼠中,建模+VSL#3组与建模组比较,小鼠结肠IL-6及IL-1β下降,但无统计学意义,TNFα无明显变化。在FXR敲除小鼠中,建模+VSL#3组与建模组比较,小鼠结肠TNFα、IL-6及IL-1β均无显著变化。结论小鼠结肠炎症状态下FXR的核表达降低,而VSL#3增加炎症状态下FXR的核表达。VSL#3可能是通过FXR起到抑制小鼠结肠成瘤的作用。第三部分激活法尼酯X受体对结肠炎的影响及其机制研究目的在动物实验及细胞水平探究法尼酯x受体激活后对肠道炎症的影响及相关机制,在临床标本中验证UC患者FXR表达的情况。方法动物实验:C57BL/6小鼠分为5组,除空白对照组外,其余4组小鼠饮用2.5%的DSS 5天建模。建模完成后,实验组分别予FXR激动剂INT-747灌胃2天及4天,对照组分别予1%甲基纤维素灌胃2天及4天。测量记录小鼠体重、结肠长度,评估各组小鼠结肠组织学评分。基于Illumina测序平台对实验组及对照组小鼠结肠组织转录组测序,qPCR验证趋化因子及炎症因子表达水平。ELISA检测血清中TNFα及IL-6水平变化。分离INT-747灌胃组和对照组小鼠结肠黏膜固有层单核细胞(LPMCs),通过流式细胞术鉴定免疫细胞表型差异。细胞实验:用FXR激动剂GW4064处理Caco-2及HT-29细胞,检测NF-κBp65磷酸化水平。临床验证:共收集正常结肠黏膜11例、轻中度UC患者活检黏膜10例、重度UC患者手术黏膜标本8例,免疫组化评估黏膜上皮FXR表达程度。结果动物实验:INT-747灌胃4天组小鼠与其对照组比较,体重增加,结肠长度增加,结肠组织学评分显著降低,而灌胃2天组小鼠与其对照组比较,上述指标无显著差异。测序及qPCR结果显示INT-747灌胃2天小鼠结肠IL-6、Csf3、CXCL1、MCP-1、IL-1β、CXCL12等趋化及炎症因子较对照组减少。INT-747灌胃小鼠血清TNFα水平显著下降,IL-6有下降趋势。流式细胞术显示INT-747灌胃小鼠结肠LPMCs中CD1 1b+细胞及单核细胞、巨噬细胞的浸润比例较对照组明显减低,中性粒细胞有降低趋势。GW4064可以抑制TNFα导致的NF-κBp65的磷酸化。临床验证:轻中度UC黏膜上皮FXR表达较正常黏膜减少,但差异无统计学意义,;重度UC黏膜上皮FXR表达较正常黏膜显著减少,差异有统计学意义。结论激活FXR可改善结肠炎症,抑制多种趋化因子及炎症因子表达,调节肠道固有层多种免疫细胞亚群。其可能机制是通过抑制NF-κB通路抑制其下游炎症因子表达进而改善结肠炎症。结肠上皮FXR表达水平与溃疡性结肠炎炎症程度呈负相关。