高强度聚焦超声经线粒体途径诱导在体子宫肌瘤细胞发生凋亡的机制研究

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目的:  通过观察和检测高强度聚焦超声治疗在体子宫肌瘤后肌瘤组织的细胞形态学改变,肌瘤细胞的凋亡率变化以及肌瘤组织中凋亡蛋白的表达差异,从细胞凋亡角度探讨高强度聚焦超声治疗在体子宫肌瘤有效性的机制,及其发生凋亡的可能途径,为临床治疗提供可靠的理论依据。  方法:  1.选取2015.9-2016.12月在暨南大学附属第一医院因多发性子宫肌瘤行腹式(阴式)子宫肌瘤剔除术或全子宫切除术的患者,共12例。术前72小时对其最大肌瘤行HIFU治疗,术后分别取HIFU治疗后靶区的子宫肌瘤组织,靶区周边的肌瘤组织和未治疗组的肌瘤组织标本各3份。  2.分别在光学显微镜下和电镜下观察各组标本的细胞形态学变化。  3.运用Annexin V-FITC/PI流式细胞学检测并比较HIFU治疗在体子宫肌瘤后靶区组,靶区周边组及未治疗组三组肌瘤细胞凋亡率的变化。  4.Western Blot法检测HIFU治疗在体子宫肌瘤后靶区的肌瘤组织,靶区周边的肌瘤组织和未治疗组的肌瘤组织中Bax,Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达变化。  结果:  1.HE染色光学显微镜下观察三组肌瘤组织细胞形态学差异。①HIFU治疗在体子宫肌瘤后靶区的肌瘤组织:可见核碎裂、血管扩张充血,部分血管可出现纤维素样坏死。同时可见间质出血及大片凝固性坏死、伴有中性粒细胞和淋巴细胞的渗出,坏死灶周边有纤维组织增生及新生的小血管形成。②HIFU治疗在体子宫肌瘤后靶区周边的肌瘤组织:细胞核未见碎裂、血管可见充血、间质水肿、胞浆淡染、部分肌瘤组织出现玻璃样变,未见明显凝固性坏死样结构。③未经HIFU消融的肌瘤组织未出现上述病理改变。  2.透射电镜下观察三组肌瘤组织的超微结构改变。①HIFU治疗在体子宫肌瘤后靶区的肌瘤组织:可见核膜部分内陷、线粒体极度肿胀、嵴消失、内质网不同程度扩张,部分胞质溶解后形成明显的空泡。②HIFU治疗在体子宫肌瘤后靶区周边的肌瘤组织:可见核膜皱缩、染色质边集、线粒体轻微肿胀、嵴减少,内质网和高尔基体等细胞器结构未受到明显损伤。同时可见由膜包裹部分损伤后的细胞器碎片形成的类凋亡小体样结构。③未治疗子宫肌瘤:可见细胞结构完整,未见明显损伤的形态学改变。  3.HIFU消融在体子宫肌瘤后,促进了细胞凋亡。靶区周边组肌瘤细胞的凋亡率较靶区组和未治疗组两组的凋亡率增加,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。  4.HIFU消融在体子宫肌瘤后,靶区周边的肌瘤组织中Bax和Caspase-3两种蛋白表达量较靶区组和未治疗组增加,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。  5.HIFU消融在体子宫肌瘤后,未治疗组肌瘤组织中Bcl-2蛋白表达量较靶区组和靶区周边组增加,但各组间差异无统计学意义(P>0.05)。  结论:  1.HIFU消融在体子宫肌瘤后,引起了靶区组织的凝固性坏死,并诱导靶区周边细胞启动了凋亡。  2.HIFU消融在体子宫肌瘤后,诱导并促进了靶区周边肌瘤细胞的凋亡,细胞凋亡率明显增高。  3.HIFU消融在体子宫肌瘤后可以诱导靶区周边肌瘤组织中Bax和Caspase-3两种蛋白的高表达,并通过线粒体途径介导肌瘤细胞的凋亡。  4.HIFU消融在体子宫肌瘤后可以抑制靶区周边肌瘤组织中Bcl-2蛋白的表达,但不能拮抗其抑制肌瘤细胞凋亡的作用。
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