单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes，LM)是引起人畜共患的李斯特菌病病原菌，为革兰氏阳性的兼性细胞内寄生小杆菌，广泛分布于自然界，并可在低温下(4-8℃)生长。上世纪80年代以来，该菌作为一种重要的食源性病原菌引起了广泛的关注。LM在食品生产和加工过程中可以通过多种途径进入成品食品中，对消费者的健康构成潜在的威胁。因此，建立LM的快速鉴定和分子分型方法对于开展食品加工过程中LM污染的溯源性调查、控制和提高食品的微生物卫生质量具有重要的意义。 以具有李斯特菌种、属特异性的iap基因和LM特异性hly基因作为靶目标，建立LM特异性三重PCR检测方法的基础上，对该系统进行了敏感性和特异性抗干扰能力试验，并直接用于人工污染牛奶样品的检测。结果表明：所建立的三重PCR具有很高的敏感性和特异性，在肉汤培养物和牛奶中的检测下限分别为3×10~1cfu／ml和1.4×10~2cfu／ml。并且，在其它细菌高水平(10~8cfu／ml)共存的情况下，特异性检测能力保持不变：含1.45×10~0cfu／ml浓度LM的牛奶样品可以在预增菌3-6h后检出。 建立了用于追踪食品加工过程中LM污染源和污染途径的分子分型方法：基于actA的基因序列分型和脉冲场电泳(PFGE)分型。在基于基因序列分型的研究中，我们选用actA作为目的基因，设计特异引物进行PCR扩增，得到820bp的DNA片段，直接测序后再用CLUSTAL V软件分析其中的506bp，结果表明：21个LM菌株可以被分成5个明显不同的克隆谱系，每个谱系的同源性均在95％-100％。采用Smal和Apal消化LM基因组DNA，用PFGE对浙江大学硕士学位论文上述细菌进行分型研究。结果显示:Smal具有良好的分型能力，21株细菌获得21个不同的酶切图谱，经聚类分析软件分析，其分型结果与基于ac认的基因序列分型的结果基本一致。15个LM奶相关和环境分离株可被分成4个谱系，其中2个谱系(C、D)均为奶相关分离株(包括原料奶、均质奶(储奶罐)和成品奶分离株，而加工厂地面污水分离株为独立的一个谱系，初步表明成品奶中污染的LM来自于奶牛场，而非加工环境。总之，本研究所建立的针对LM的三重PCR具有良好的敏感性和特异性，可疑奶类食品在经过适当时间的预增菌后，可用该方法直接进行LM的检测。两种分子分型方法也均显示了良好的分型能力，可用于食品加工环境和加工过程的LM监测和控制。