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近年来,随着越来越多的新型胞外多糖的发现,微生物胞外多糖的研究逐渐引起人们的兴趣,其主要应用于食品、医学、石油化工以及环境治理等方面。部分海洋微生物多糖还具有抗肿瘤和免疫调节活性,为临床和医药护理做出了重大贡献。 本文从一株实验室保藏的能够分泌细菌胞外多糖的菌株出发,开展了菌株的分离纯化、种属鉴定、多糖发酵条件优化、多糖分离纯化、多糖组成分析及多糖的抗氧化特性等研究工作。主要的研究结果如下: (1)通过实验室保藏菌株SFEP-01菌落形态形态学观察、生理生化试验、16SrDNA序列分析,确定该菌株属于假单胞菌属,并将其命名为Pseudomonas sp.SFEP-01。 (2)通过单因素实验、正交试验和响应面分析实验对发酵培养基成分和发酵培养条件进行了考察,确定菌株 SFEP-01产多糖最优发酵培养基组成为:甘油83.3g/L,酵母粉5.7g/L,氯化钠8.2g/L;最佳发酵条件优化结果为:发酵温度30℃,装液量50ml,摇床转速180r/min,接种量4%。在此优化条件下,多糖最高产量达11.4g/L。 (3)经乙醇沉淀法提取、三氯乙酸法除蛋白后得到粗多糖,再经过DEAE-琼脂糖凝胶及葡聚糖凝胶 G-100进行分离纯化,得到两个多糖组分:EPS-Ⅰ和EPS-Ⅱ,EPS-Ⅰ和EPS-Ⅱ量的比例约为3:1。收集的单一多糖组分经透析、浓缩、冷冻干燥得到纯多糖样品。经过水解、纸层析及高效液相色谱仪分析,确定多糖EPS-Ⅰ单糖组成为葡萄糖、甘露糖和鼠李糖,且三种组分的比例为1:1:1,而EPS-Ⅱ仅有葡萄糖组成。 (4)考察了EPS-Ⅰ和EPS-Ⅱ的抗氧化特性,结果表明:EPS-Ⅰ具有较强的抗氧化活性,还原能力略高于维生素C,对羟基自由基、超氧阴离子自由基以及DPPH自由基的清除率及抑制率略低于维生素C。EPS-Ⅱ的还原力及对各种自由基的清除能力很低。