【摘 要】
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目的制备新型负载NGF的可注射水凝胶并复合骨髓间充质干细胞构成复合载体,探讨其对大鼠长段坐骨神经缺损的修复作用。方法利用京尼平交联制备出的壳聚糖透明质酸复合水凝胶,采用试管倒置法检测复合水凝胶的凝胶时间;利用NGF释放试验检测京尼平对水凝胶缓释性能的影响;利用CCK-8、Live/Dead染色检测京尼平以及京尼平交联的壳聚糖透明质酸水凝胶对细胞生存状态的影响;利用SFI评估大鼠坐骨神经恢复情况;利
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目的制备新型负载NGF的可注射水凝胶并复合骨髓间充质干细胞构成复合载体,探讨其对大鼠长段坐骨神经缺损的修复作用。方法利用京尼平交联制备出的壳聚糖透明质酸复合水凝胶,采用试管倒置法检测复合水凝胶的凝胶时间;利用NGF释放试验检测京尼平对水凝胶缓释性能的影响;利用CCK-8、Live/Dead染色检测京尼平以及京尼平交联的壳聚糖透明质酸水凝胶对细胞生存状态的影响;利用SFI评估大鼠坐骨神经恢复情况;利用Masson染色评估大鼠腓肠肌萎缩恢复情况;利用HE染色评估再生轴突数量;利用Western blot检测相关蛋白表达情况。结果在37℃下,试管倒置法检测出复合水凝胶的成胶时间为10±2min。NGF缓释实验显示,随着京尼平浓度的升高,NGF爆发性释放降低,缓释时间延长,最终缓释率增高。CCK-8及Live/Dead染色显示,京尼平的毒性呈急性,剂量相关性,延长交联时间可以降低其毒性,提高细胞生存率及增殖速度。动物实验结果显示复合凝胶组大鼠SFI恢复情况与自体神经组相似,好于单纯硅胶管组。表现为腓肠肌湿重恢复率更高,肌纤维直径更大,胶原纤维占比更少,神经再生轴突数量更多。Westernblot结果显示,第12周时,促进性神经生长标志物GAP-43表达上调、抑制性神经生长标志物Nogo表达降低。结论京尼平交联的可注射水凝胶具有良好的生物相容性和较低的毒性,能够成为NGF的缓释载体,延长NGF缓释时间和缓释率。复合水凝胶能支持MSC生长和释放。作为导管内填充材料,促进了大鼠长段神经缺损的损伤修复。
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