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研究目的本文章旨在讨论尿路上皮癌BRCA1 mRNA与蛋白的表达水平的相关性。尿路上皮癌是较为多见的泌尿系统恶性肿瘤,发病率排名为全国恶性肿瘤的第8名,并且每年递增。在全部膀胱癌中尿路上皮癌占比例最大,约90%以上。乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)为一种抑癌基因,具有参与DNA的双链受损修复的功能。BRCA1在铂类耐受相关的DNA受损中起到相应作用,是引起铂类耐药的主要机制,可以很好地评估铂类的耐药性。通过本研究来探讨评估铂类化疗药治疗敏感、简便、价廉的方法。研究方法1.免疫组化BRCA1蛋白检测石蜡切片3～5μm,60℃烤片lh按照罗氏Benchmark XT Ventana全自动染色说明书设置染色程序,进行自动免疫组化检测。染色时,按照要求在每轮染色中设置2张BRCA1阳性对照片。2.石蜡切片组织RNA提取和BRCA1基因表达检测(1)RNA获取:根据天根石蜡组织RNA提取试剂盒的操作步骤提取各样本的RNA,并对获取的RNA用紫外分光光度计测定。A260/A280需在1.8-2.2之间,浓度≥12.5ng/μl进行反转录。(2)反转录:按14μl体系,将8μlRNA、2μl primer(N7,20μM)、4μldNTP(2.5mM)漩涡混匀,短离心。70℃预处理5min;4℃放置2min,分别添加4μl5×RTbuffer、1μlRNase inhibitor、1μl RT Transcriptase,共计 20μl。PCR 仪上 42℃、60min,90℃、10min。程序完毕后,取出cDNA样本。(3)Real-time PCR:根据Real-time PCR反应表记录。整板设置一个NTC对照,一个阳性对照,对照探针选用GAPDH。将cDNA样品及TaqMan探针BRCA1(探针避光保存)从-20℃冰箱取出解冻备用。按表1用DEPC水、TaqMan Gene Expression Master Mix、cDNA模板、探针BRCA1配置20μl体系;短离心,直到无气泡后上7500 Real Time PCR System进行检测。研究结果1.尿路上皮癌组织BRCA1蛋白检测结果50例可供评价的病例中,BRCA1免疫组化染色阳性率为88%(44/50),其中染色“+”占 56%(28/50),“++”占 32%(16/50);免疫组化阴性率为 12%(6/50)。2.尿路上皮癌组织BRCA1mRNA检测结果50例可供评价的病例中,BRCA1mRNA表达分布散点图呈正态分布,以低表达分布为主,BRCA1 mRNA低表达率为64%(32/50),中表达率为36%(18/50)。3.尿路上皮癌组织BRCA1 mRNA表达水平与免疫组化阳性水平的相关性分析尿路上皮癌组织BRCA1 mRNA低水平一组免疫组化阴性率为15.6%(5/32),阳性率为 84.4%(27/32),其中“+”阳性率为 78.13%(25/32),“++”阳性率为 6.25%(2/32);BRCA1mRNA中表达一组免疫组化阴性率5.56%(1/18),阳性率94.44%(17/18),其中“+”阳性率为 16.67%(3/18),“++”阳性率为 77.78%(14/18)。经 Wilcoxon 两样本检验,BRCA1 mRNA低表达组与中表达组的免疫组化染色程度差异显著(P<0.001),Spearman等级相关分析显示二者呈正相关(rs=0.653,P<0.001)。研究结论实时荧光定量PCR检测mRNA表达与免疫组化检测蛋白表达皆为评估尿路上皮癌的可选方法。