论文部分内容阅读
背景与目的白细胞介素15受体阿尔法(Interleukin 15 Receptor alpha,IL-15Rα)是白细胞介素15(Interleukin 15,IL-15)的特异性受体,IL-15与细胞表面的IL-15Rα结合形成IL-15/IL-15Rα复合物后与白细胞介素2受体贝塔(Interleukin 2 Receptor bita,IL-2Rβ)以及白细胞介素2受体伽马(Interleukin 2 Receptor gama,IL-2Rγ)形成异三聚体,主要调节细胞毒性T细胞和NK细胞的增殖和分化。IL-15在受体结合、信号传递和生物学效应等方面与IL-2有共同特征,IL-2已用于临床治疗肾细胞癌和黑色素瘤,故IL-15在肿瘤免疫治疗中也备受关注。IL-15Rα除在单核细胞和树突状细胞表面表达外,在肝脏、心脏、脾脏、肺、骨骼肌和内皮细胞等许多非淋巴组织中也能检测到。胃癌(Gastric carcinoma,GC)作为高发病率和高致死率的肿瘤,其癌细胞也具有表达IL-15Rα的功能。癌症基因组图谱(The cancer genome atlas,TCGA)数据库分析结果显示IL-15Rα在胃癌组织的表达显著高于癌旁组织。EB病毒相关性胃癌(Epstein-Barr virus associated gastric carcinoma,EBVaGC)是一种胃癌细胞内感染EBV的胃癌亚型,EBV的感染会导致宿主细胞的基因组发生表观遗传学改变,另有研究报道IL-15Rα在感染EBV的胃癌细胞AGS(AGS-EBV)中表达受抑制,提示IL-15Rα在胃癌中可能发挥重要的作用。本实验主要研究IL-15Rα通过IL15/IL-15Rα信号通路对胃癌细胞的作用,以期初步理解胃癌细胞所表达IL-15Rα对胃癌发生发展的影响及对胃癌免疫治疗潜在靶向位点进行探索。方法1.TCGA数据库分析胃癌样本和癌旁样本IL-15RαmRNA水平,RT-PCR和Western Blotting分析胃癌细胞IL-15Rα的表达水平。2.MTT细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕实验与transwell小室实验检测IL-15Rα表达水平对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响。3.RT-PCR和Western Blotting检测甲基化酶抑制剂5-氮杂-2′脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理胃癌细胞后IL-15RαmRNA和蛋白的变化。MTT细胞增殖实验、划痕实验检测5-Aza-CdR药物处理胃癌细胞后胃癌细胞增殖与迁移能力的变化。4.MTT细胞增殖实验和克隆形成实验检测外源性IL-15对胃癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测外源性IL-15对胃癌细胞凋亡的影响及对与胃癌细胞共培养外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)p-STAT5水平的影响。结果1.TCGA数据库分析胃癌样本与癌旁样本IL-15RαmRNA水平,胃癌样本IL-15RαmRNA水平比癌旁样本高(P<0.05)。2.胃癌细胞AGS中IL-15Rα的表达水平显著高于AGS-EBV细胞(P<0.05),且高表达IL-15Rα的AGS细胞比低表达IL-15Rα的AGS-EBV细胞在增殖、迁移与侵袭方面能力强(P<0.05)。3.甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR对胃癌细胞中IL-15Rα基因的表达具有抑制作用(P<0.05),且导致细胞增殖和迁移能力降低(P<0.05)。4.外源性IL-15(100ng/mL)可促进胃癌细胞增殖,抑制其凋亡(P<0.05)。5.外源性IL-15(100ng/mL)可促进表达IL-15Rα的胃癌细胞对共培养PBMC活化的诱导作用(P<0.05)。结论1.TCGA数据库分析结果显示IL-15Rα在胃癌组织中高表达,提示IL-15Rα可能参与胃癌的发生发展。2.结合高表达IL-15Rα的AGS细胞比低表达IL-15Rα的AGS-EBV细胞在增殖、迁移与侵袭方面能力强,甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR抑制胃癌细胞IL-15Rα表达且导致细胞增殖和迁移能力降低的生物学行为特征,提示临床病理中EBVaGC的预后较好可能与IL-15Rα低表达相关。3.表达IL-15Rα的胃癌组织免疫细胞浸润缺乏时,外源性IL15促进肿瘤细胞增殖,使用IL15治疗可能具有促进肿瘤进展的危险;而伴有免疫细胞浸润时,外源性IL15依赖胃癌细胞内源性IL-15Rα对PBMC的活化则可能有利于IL-15介导的免疫抑制治疗。