目的：研究金钗石斛多糖对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)的影响，为进一步研究金钗石斛多糖的药理作用提供实验依据。 方法：采用水提醇沉法提取金钗石斛多糖，用化学的方法判定多糖的性质，红外光谱法鉴定该多糖的结构特征，紫外分光光度法进行初步纯度判定，苯酚-硫酸法进行含量测定。体外培养小鼠腹腔巨噬细胞，分为：正常对照组，LPS组(10μg/mL LPS)，金钗石斛多糖实验组，后者先用50～400mg/L浓度的金钗石斛多糖与巨噬细胞温孵1h后，再加入10μg/mL LPS共同培养，以诱导巨噬细胞的活化。采用放射免疫法检测细胞培养液中TNF-α的含量，硝酸酶还原法测定细胞培养液中NO的含量，分析其时间-剂量-效应关系。同时采用荧光法测定细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性，实时PCR(real-time PCR)法测定TNF-α mRNA、iNOSmRNA的表达。 结果：①提取的金钗石斛多糖经理化性质分析，表现出多糖的特性，红外光谱分析具有典型多糖特征吸收峰，紫外光谱200 nm处有最大吸收峰，在260 nm～280 nm间无明显吸收峰，说明蛋白质、核酸、氨基酸较少。苯酚-硫酸法测得金钗石斛多糖相对含量为79.35％0②LPS组与100mg/L的金钗石斛多糖的实验组TNF-α的分泌均在2h达峰值，随后下降，8h后恢复至正常水平；随着时间延长臣噬细胞释放NO逐渐增多，24h达顶峰，持续至48h。100mg/L的金钗石斛多糖实验纽巨噬细胞TNF-α、NO分泌均低于LPS组。③LPS组与正常对照组比较，TNF-α、NO分泌增加(P<0.01)，iNOS活性升高(P<0.01)；TNF-αmRNA、iNOSmRNA的表达增高(P<0.01)。4组不同浓度(50～400 mg/L)金钗石斛多糖实验组与LPS组比较，TNF-α、NO分泌减少(P<0.05)，iNOS活力降低(P<0.01)，TNF-α mRNA、iNOS mRNA表达下降(P<0.05)。各实验组之间，金钗石斛多糖浓度越高，TNF-α、NO的分泌、iNOS活性及TNF-α mRNA、iNOS mRNA表达下降越明显(P<0.05)。 结论：LPS能刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、NO：金钗石斛多糖可明显抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、NO；随着金钗石斛多糖浓度增加，抑制效应越明显；其可能的机制与金钗石斛多糖抑制小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α mRNA、iNOS mRNA的表达有关。