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本研究应用EFS40玻璃化液对6.5~7日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻及解冻后直接移植试验。所用胚胎都是经FSH超排处理绵羊获得的。胚胎经形态鉴定后,用胚胎存放液(含20%FCS的PBS液)清洗。冷冻前,胚胎在室温(18~25℃)下置于含10%乙二醇的PBS液中平衡10分钟,移入玻璃化液EFS40中装管并平衡30秒钟,液氮气中熏蒸2分钟后投入液氮中保存,解冻时在室温(18~25℃)空气浴10秒钟后,32℃水浴20秒钟解冻。 试验1:胚胎解冻后以0.5M蔗糖液一步(6分钟)除去保护剂或用胚胎存放液一步直接除去保护剂,然后胚胎移入胚胎存放液中洗3次,将形态正常的胚胎手术移植至同期发情的受体绵羊子宫内;试验2:玻璃化冷冻胚胎解冻后在0.25ml聚乙烯塑料细管内脱除防冻剂直接装管移植,以常规冷冻解冻为对照组。试验结果:试验1共冷冻道赛特与东北半细毛羊杂交青年羊胚胎32枚,解冻回收27枚,其中21枚形态正常,解冻后透明带完整率为100%(27/27);形态完整率为77.78%(21/27),移植后的妊娠率为47.37%(9/19),胚胎存活率为42.86%(9/21),其中桑椹胚、囊胚的冻后形态完整率分别为81.82%(9/11)、75.00%(12/16)(P>0.05),差异不显著;桑椹胚和囊胚移植后的妊娠率分别为37.50%(3/8)、54.55%(6/11),胚胎存活率分别为33.33%(3/9)、50.00%(6/12),差异均不显著(P>0.05)。13枚冷冻胚胎解冻后用0.5M蔗糖脱防冻剂,其中10枚形态恢复正常(76.92%),与直接用胚胎存放液脱除防冻剂的结果(78.57%,11/14)无差异(P>0.05)。将两种方法解冻的形态正常的胚胎移植,移植后的妊娠率分别为44.44%(4/9)、50.00%(5/10)、胚胎存活率分别为40.00%(4/10)、45.45%(5/11)(P>0.05)差异不显著;试验2将10枚解冻后的胚胎细管内脱防冻剂后,直接装管移植给8只受体(其中2只受体移植双胚),妊娠率为50.00%(4/8),胚胎成活率为40.00%(4/10),(其中受体1只在妊娠后第2个月流产,最后有3只受体产3只羔羊)与同期常规冷冻解冻组相比无显著差异(P>0.05)。 本研究结果表明:绵羊胚胎应用EFS40进行玻璃化冷冻,解冻后用胚胎存放液细管内脱除防冻剂后直接移植获得较高的的妊娠率和胚胎存活率。该方法与常规方法比较简便、省时、可普及,特别是能降低绵羊胚胎移植的成本,加速绵羊品种改良。