酮病是奶牛主要的群发性、高发性疾病之一,其病理学基础是能量负平衡。本研究的目的是研制一种拥有自主知识产权的乳汁β-羟丁酸(β-hydroxybutyric acid,BHBA)分析试纸条,用于奶牛亚临床酮病的诊断,填补国内空白。根据生物有机化学显色法原理,建立了用于检测乳汁BHBA的试纸条的反应原理,对试剂及其配比、反应条件等分别进行了筛选、优化和确定。成功建立了可用于奶牛乳汁BHBA定量检测的紫外分光光度计检测方法,检测性能较好,与荧光法检测具有良好的相关性(r=0.9939)。所建立方法需要仪器比较常规、检测成本相对较低,是一种可用于乳汁BHBA定量检测的方法。依据试纸条反应原理及试剂配比,配制了试纸条的反应液,采用薄型中速定量滤纸、聚乙烯塑料胶板为材料成功的组装了试纸条。制作了试纸条的标准比色卡,以200μmol/L作为试纸条阳性结果判读标准。确定试纸条与被检样品反应的结果判读时间为反应3 min后。稳定性试验表明,组装的试纸条可在2-8℃条件下保存18个月检测性能不降低,符合国家食品与药品监督管理局关于临床体外诊断试剂的相关标准。所研制试纸条的特异性、敏感性和重复性较好。已于2007年申报国家发明专利(申请号:200710056031.9),现正在起草乳汁BHBA分析试纸条的技术条件标准。以血液BHBA>1200μmol/L作为奶牛亚临床酮病的诊断标准,自制乳汁BHBA分析试纸条的检测敏感性和特异性与国外同类试纸条大致相当。自制试纸条和国外同类试纸条的价格比较结果表明自制乳汁BHBA分析试纸条的价格将远低于国外同类试纸条的售价。结合我国实际国情,自制乳汁BHBA分析试纸条具有广阔的应用前景和较大的经济价值。