【研究目的】研究发现,肥胖的发展与脂肪组织形成所需的血管生成密切相关。在调控脂肪组织血管生成的众多因子中,对血管内皮生长因子(VEGF)研究最多,它被认为是最关键的促血管生成因子。已有研究报道,抑制肿瘤生长的血管生成抑制剂可减轻肥胖动物体重。故以抗血管生成为靶标来控制脂肪组织的形成可能为肥胖提供了一种新的治疗策略。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶儿茶素中含量最丰富且最具生物活性的成分。EGCG对肥胖及相关代谢异常的益处已被大量研究所证实。同时,EGCG的抗血管生成活性在抑制肿瘤组织血管新生等方面也屡见报道。但EGCG是否能抑制脂肪组织的血管新生?目前还未见报道。根据已有研究我们提出假设:EGCG能通过抑制脂肪组织血管生成来减少脂肪组织增生,从而改善肥胖。本研究拟以高脂饮食大鼠为研究对象,观察EGCG对高脂饮食大鼠白色脂肪组织血管生成的影响,并基于EGCG的强抗氧化性与抗炎性,从氧化应激与炎症的角度初步探索EGCG对白色脂肪组织血管生成的作用机制,为以血管生成为靶标治疗肥胖及相关慢性病提供依据。【研究方法】40只雄性离乳SD大鼠,随机分为5组,分别为正常对照组,高脂饮食组,EGCG低、中、高剂量干预组,每组8只。正常对照组喂饲基础饲料(热量343.92 kcal/100g,脂肪13.8%),高脂饮食组喂饲高脂饲料(能量401.8 kcal/100 g,脂肪36.3%),EGCG各干预组在喂饲高脂饲料的同时以灌胃的方式补充相应剂量EGCG,分别为低剂量组100mg/(kg·d)、中剂量组200mg/(kg·d)、高剂量组400mg/(kg·d)。喂养8周末,处死大鼠。(1)检测肥胖指标(体重、内脏脂肪重量),糖脂代谢指标[血清空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)]和肝脏氧化应激水平[总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性、丙二醛(MDA)含量],并与同类研究比较确定EGCG最佳干预剂量。(2)以EGCG最佳干预剂量组为EGCG干预组,与正常对照组、高脂饮食组比较,观察各组大鼠显微镜下腹腔脂肪组织脂肪细胞大小、血管密度,Elisa法检测大鼠血清VEGF浓度,RT-PCR检测脂肪组织VEGF m RNA的表达水平,研究EGCG对各组大鼠白色脂肪组织的血管生成作用。(3)RT-PCR检测脂肪组织核因子E2相关因子(Nrf2)及下游抗氧化蛋白血红素加氧酶-1(HO-1)、过氧化氢酶(CAT)、SOD、GPx,炎症因子白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)m RNA的表达水平,探索EGCG对脂肪组织血管生成作用的可能机制。【研究结果】1.高脂饮食组大鼠实验末体重、肝脏重量、血清FBG均显著高于正常对照组(均P<0.05)。EGCG各剂量组能有效降低高脂饮食大鼠体重、肝脏重量、血清FBG和TG水平(P<0.05)。低剂量EGCG可升高肝脏GPx活力(P<0.05)。中剂量EGCG可降低肝脏MDA含量(P<0.05)。与同类研究综合比较,确定中剂量EGCG[200mg/(kg·d)]为EGCG改善高脂饮食大鼠体重、糖脂代谢异常及肝脏氧化应激水平的最佳干预剂量。2.高脂饮食组大鼠脂肪细胞大小、单位脂肪细胞血管计数、血清VEGF浓度、脂肪组织VEGF m RNA表达水平均显著高于正常对照组(均P<0.05)。EGCG能显著降低高脂饮食组上述这些指标(均P<0.05)。3.EGCG干预组大鼠脂肪组织Nrf2、HO-1、SOD、GPx、CAT m RNA表达均显著高于高脂饮食组及正常对照组(均P<0.05)。EGCG干预组大鼠脂肪组织MCP-1、IL-6m RNA表达显著低于高脂饮食组(均P<0.05)。【研究结论】1.EGCG改善高脂饮食大鼠肥胖相关代谢异常及氧化应激水平的最佳干预剂量为200mg/(kg·d)。2.EGCG可降低高脂饮食大鼠血清VEGF生成,白色脂肪组织血管密度和VEGF m RNA表达,对白色脂肪组织血管生成具有抑制作用。3.EGCG抑制白色脂肪组织血管生成的作用可能与上调Nrf2/HO-1途径提高抗氧化酶SOD、CAT、GPx表达,减少ROS生成和降低炎症反应有关。