致病菌是一类能感染生物体使其产生疾病的微生物。它们传播和繁殖迅速,在自然界中广泛存在,对人类健康造成了诸多危害,严重威胁着全球公共卫生安全。致病菌感染在发展中国家以食源性感染为主,而在发达国家则主要表现为合并感染和医院获得性感染。某些革兰氏阳性菌是临床上典型的致病菌,可引发人类感染甚至导致死亡。因此,开发简单快速,灵敏有效的革兰氏阳性菌检测方法,对于感染性疾病的预防和临床诊断具有重要意义。本文基于抗菌肽Phe¹¹-protonectin对革兰氏阳性菌的识别作用,结合化学发光和生物发光分析法建立了两种检测革兰氏阳性菌的新方法。（1）基于抗菌肽Phe¹¹-protonectin功能化磁性微球的生物发光法检测革兰氏阳性菌活菌总量基于抗菌肽Phe¹¹-protonectin对革兰氏阳性菌的识别作用,建立了一种简单快速的生物发光分析法,用于革兰氏阳性菌活菌的检测。Phe¹¹-protonectin是基于天然阳离子广谱抗菌肽protonectin设计改造的新型抗菌肽,它的选择性较前体肽大大改善,对革兰氏阳性菌具有显著的识别能力和抗菌作用。本研究以Phe¹¹-protonectin功能化的磁性微球作为识别载体,可从多种样品基质中高效地富集和分离革兰氏阳性菌。活菌中的三磷酸腺苷含量约为10^-18 mol,细菌死亡后,其胞内的三磷酸腺苷会被迅速分解。因此,将捕获的活菌裂解后,其胞内释放的三磷酸腺苷可以与萤光素和萤光素酶反应产生生物发光,进而实现对革兰氏阳性菌活菌的定量检测。本研究以金黄色葡萄球菌、变异链球菌和蜡样芽孢杆菌为模式菌,探究了该方法用于革兰氏阳性菌活菌检测的可行性。研究结果表明,革兰氏阳性菌活菌检测的线性范围为2.3×10³-1.2×10⁷ CFU mL^-1,检测限低至2.2×10² CFU mL^-1。整个检测过程可以在33分钟内完成。本方法对革兰氏阳性菌活菌具有较好的选择性,革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌死菌对该方法的检测几乎没有干扰。该方法成功应用于桃汁、葡萄糖注射液、尿液和湖水中的革兰氏阳性菌检测,表明本方法在食品、药品、生物样品和环境样品中检测革兰氏阳性菌的良好应用前景。（2）基于抗菌肽Phe¹¹-protonectin与免疫球蛋白G双位点识别作用的化学发光法检测金黄色葡萄球菌基于Phe¹¹-protonectin这一新型阳离子抗菌肽对革兰氏阳性菌的识别作用,结合免疫球蛋白G对金黄色葡萄球菌表面的A蛋白的识别作用,构建了一种用于检测金黄色葡萄球菌的化学发光分析方法。Phe¹¹-protonectin是基于protonectin而人为设计的阳离子抗菌肽,利用其与革兰氏阳性菌细胞膜的强静电作用,可将Phe¹¹-protonectin作为金黄色葡萄球菌的新型识别元件。由于金黄色葡萄球菌细胞壁上的A蛋白可以与免疫球蛋白G的Fc片段特异性结合,我们将免疫球蛋白G作为捕获剂,进一步提高该方法的选择性。免疫球蛋白G捕获的金黄色葡萄球菌可以被碱性磷酸酶标记的Phe¹¹-protonectin示踪,催化发光底物产生化学发光信号,从而实现对金黄色葡萄球菌的定量检测。研究结果表明,金黄色葡萄球菌检测的线性范围为1.0×10³-1.0×10⁷ CFU mL^-1,检测限为2.9×10² CFU mL^-1。整个检测过程可以在130分钟内完成。革兰氏阴性菌和其他革兰氏阳性菌对金黄色葡萄球菌的检测几乎没有干扰,表明本方法具有较好的选择性。该方法已成功用于检测尿液、生理盐水注射液和牛奶中的金黄色葡萄球菌,回收率在83.0%-110.0%之间,表明本方法在临床诊断、药品和食品安全监控等方面具有较好的应用前景。