中药菟丝子始载于《神农本草经》,被列为上品,其补肝肾,强筋骨。具有养肝明目、补肾壮阳,安胎的功效。菟丝子味甘性偏温,性平,既可补阳,又可益阴,具有温而不燥,补而不腻的特点,为保肝之良药。菟丝子的药用历史悠久,且炮制历史悠久。古代常用炮制方法为酒制法、盐制法、炒制,此外还有黄精汁制、米泔制。《中国药典》(2010版)收载菟丝子的炮制品规格为盐水炙菟丝子,地方炮制规范中还有酒炙、清炒和制饼等。清代《得配本草》总结菟丝子不同炮制品的作用为“补肾气,淡盐水拌炒;暖脾胃,黄精汁煮;暖肌肉,酒拌炒;治泄泻,酒米拌炒”,可见古人认为菟丝子酒制在于增强其升提之功,盐制在于引经、加强归肝肾经作用。现代中医理论认为,菟丝子味甘性偏温,补阳胜于补阴,生用以养肝明目力胜,多用于肝虚目暗;盐水炒后不温不寒,平补阴阳,并引药入肾,增强补肾固精安胎作用;酒炙后活血温肾壮阳作用增强,并可提高煎出效果,便于粉碎;炒菟丝子其功用与生品相似,但炒后可提高煎出效果,便于粉碎和制剂,多用于丸散。从古代的文献到现代的研究说明菟丝子不同炮制品具有不同的临床作用特点。本课题是是国家自然基金项目《南方菟丝子盐炙增强补肾固精的药效物质基础及炮制原理研究》中延伸的一部分内容,本实验意在从物质基础变化的角度比较研究菟丝子生品及各炮制品对肝脏的保护作用。目的:南方菟丝子黄酮类化学成分为其主要有效成分之一,通过研究菟丝子黄酮类化学成分并比较其炮制前后黄酮类化学成分变化,及生品和各炮制品的醇提物对小鼠急性肝损伤和对肝细胞氧化损伤的保护作用研究,初步阐明菟丝子炮制前后保肝作用的不同及黄酮类成分的变化。方法:采用大孔树脂柱、聚酰胺柱层析等方法对南方菟丝子的95%乙醇部位进行了分离,得到的单体化合物进行核磁共振谱图的解析从而鉴定化合物的结构;分别炮制了菟丝子的清炒品、酒炙品和盐炙品,运用HPLC测定了生品及各炮制品中金丝桃苷、紫云英苷、山奈酚、槲皮素和异鼠李素五种单体黄酮的含量;体外细胞实验:将菟丝子的生品及各炮制品醇提物作用于正常肝细胞(L02),观察其对细胞生长的影响,确定给药的合适浓度;考察了H2O2对L02细胞氧化损伤的浓度;将菟丝子的生品及各炮制品醇提物作用于L02细胞,考察其对H2O2氧化损伤L02细胞时,细胞的生长状态,同时Elisa试剂盒检测细胞上清液中MDA、GSH及炎性因子TNF-α和IL-6的含量;动物实验:采用预防性给药,菟丝子的生品及各炮制品醇提物给小鼠灌胃七天,末次给药后给予D-氨基半乳糖造成小鼠急性肝损伤的模型,采血进行血清指标(AST、ALT、MDA、GSH)检测,取肝脏用于制作病理切片。结果:从南方菟丝子中分离了 7个化合物,解析并鉴定了 6个化合物,分别为金丝桃苷、紫云英苷、山奈酚、樹皮素、异鼠李素、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖(2→1)-β-D-芹糖苷;菟丝子的生品和各炮制品中金丝桃苷、紫云英苷、山奈酚和槲皮素的含量存在显著差异:生品中金丝桃苷和紫云英苷含量为较高,且二者的含量比例为1:1;炮制之后,金丝桃苷和槲皮素的含量呈现上升趋势,盐炙品中金丝桃苷含量最高,其次为清炒品,而酒炙品中其含量略有下降;槲皮素含量以酒炙品中含量最高,为生品中含量的2倍,其次为清炒品,最后为盐炙品;紫云英苷和山奈酚的含量呈现下降趋势,酒炙品中二者含量下降最低,其次为盐炙品和清炒品。体外细胞实验结果:菟丝子的生品及各炮制品对L02细胞的生长具有促进作用,并且在25mg/L～200mg/L的浓度范围内,随着浓度的增加,促进作用增强;菟丝子的生品和炮制品的醇提物对H202氧化损伤L02细胞的实验,细胞活率的比较,菟丝子生品和各炮制品醇提物组与模型组比较均有显著差异;通过细胞上清液中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量的比较,模型组中氧化性物质丙二醛含量明显增加,还原型物质谷胱甘肽的含量明显下降,清炒品100组、酒炙品100组和盐炙品100组的丙二醛和还原型谷胱甘肽含量与模型组均有显著性差异,抗氧化能力:菟丝子酒炙品醇提物>菟丝子盐炙品醇提物>菟丝子清炒品醇提物>菟丝子生品醇提物。细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)和含量的比较,生品50组、生品100组和清炒品50组与模型组比较均有显著差异,抗炎作用菟丝子生品醇提物>菟丝子清炒品醇提物>菟丝子酒炙品醇提物>菟丝子盐炙品醇提物。动物实验结果:通过动物实验中小鼠血清中AST、ALT、MDA、GSH含量的检测发现,菟丝子的生品组和盐炙组ALT的含量与模型组比较,具有显著差异,说明菟丝子的生品和盐炙品对D-GalN诱发的急性肝损伤模型,具有较好的保肝作用,其中菟丝子的生品组的保肝作用强于盐炙品组;菟丝子的生品组及各炮制品组中丙二醛和还原型谷胱甘肽的含量与模型组比较,均无显著性差异。小鼠肝组织病理切片的结果显示:模型组小鼠肝组织的肝细胞肿胀、胞浆内炎性细胞明显增多,门管区及血管周围可见明显的炎性细胞浸润。通过观察切片发现菟丝子及阳性药各治疗组小鼠肝组织病变较模型组减轻。结论:菟丝子的生品和炮制品的醇提物对L02细胞的生长均有促进作用,这与中医理论中菟丝子“养肝、补肝”的作用是一致的;菟丝子的生品和各炮制品的醇提物组可降低H2O2氧化损伤程度,对H202氧化损伤L02细胞有一定的保护作用;菟丝子酒炙品醇提物抗氧化能力最强,菟丝子生品醇提物抗炎作用最强。菟丝子的生品和盐炙品对D-GalN诱发的小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用,生品较盐炙品作用更好。结合动物、病理和细胞的实验结果综合分析发现菟丝子生品保肝作用最好,这与现代中医理论“生用养肝明目力胜”相一致。本实验以菟丝子生品及各炮制品的黄酮成分作为物质基础进行研究,进一步探究了蓋丝子生品和各炮制品在保肝作用这一药效方面的特点。菟丝子生品保肝作用最好,这与生品中单体黄酮的含量和比例是密切相关的,细胞实验显示酒炙品抗氧化效果最好,这与炮制后,酒炙品中槲皮素的含量最高,是生品的2倍,具有一定的相关性,但动物实验显示给药组和模型组在抗氧化作用方面没有统计学意义,还需要进一步深入研究。各组的药效与黄酮成分之间的关系还应进行谱效分析并进行验证,后续应进一步研究。