临床血细胞膜脂肪酸谱检测方法研究

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测定生物体内脂肪酸含量一直是临床研究以及脂质组学研究的重点。脂肪酸在人体内存在游离态与非游离态两种形式,而且碳链长度由八个碳到二十六个碳,这其中又存在大量的顺反异构体,这都给全面检测脂肪酸含量增加了难度。血清中脂肪酸含量被认为可以反映短期内脂肪酸代谢状况,而研究者也报道了红细胞膜上的脂肪酸含量更能反映人体内长期脂肪酸代谢状况。但白细胞膜上的脂肪酸与血小板膜上的脂肪酸含量以及代谢状况分析却未见报道。本论文从血细胞分离出发,建立了一整套检测细胞膜脂肪酸含量的方法,并对44位健康志愿者的血样进行了血细胞膜脂肪酸含量分析。具体结论如下:1、在Ficoll梯度密度离心分离法的基础上,建立了血细胞分离方法。血细胞分离效果好,通过加入羟乙基淀粉,HEPES等试剂,优化了分离步骤,解决了分离出的白细胞与血小板中红细胞污染的问题。2、比较了TG-WAX色谱柱与SP-2560色谱柱两种极性色谱柱对复杂脂肪酸甲酯组分分离能力,结果显示,利用TG-WAX色谱柱分离脂肪酸甲酯时,几种顺反异构体不能有效分离。但TG-WAX色谱柱的柱长短,当分析组分不复杂时,利用其进行检测工作可以缩短分析时间。SP-2560色谱柱对复杂脂肪酸甲酯组分的分离效果较好,满足本论文分离要求。本论文应用SP-2560色谱柱进行了一系列检测方法学验证工作,保证检测方法的准确性。同时对衍生方法也进行了准确性,温度性考察。3、对来自北京,长沙两地的健康志愿者进行脂肪酸检测分析,总结了健康27种人红细胞膜,白细胞膜,血小板膜脂肪酸含量范围。并且对比了两地健康志愿者脂肪酸含量差异,结果显示,两地志愿者的脂肪酸含量存在明显差异,说明不同地域的人在生活以及饮食习惯上存在的差异会对细胞膜脂肪酸含量带来影响。
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