论文部分内容阅读
围绝经期综合症由于卵巢功能衰退、性腺轴紊乱而导致。卵巢功能的衰退与卵泡闭锁密切相关,颗粒细胞对于卵泡是否闭锁至关重要。国内外已有许多研究证明hUCMSCs移植可改善卵巢功能,减少卵巢颗粒细胞的凋亡,但改善机制暂不清楚,本研究选取自然衰老的围绝经期SD大鼠模型,经尾静脉移植hUCMSCs,检测颗粒细胞凋亡关键蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平。探讨hUCMSCs移植减少围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞凋亡是否与以上颗粒细胞凋亡关键蛋白表达水平相关,为临床上应用hUCMSCs移植延缓女性卵巢功能衰退提供理论依据。目的1、探讨hUCMSCs移植后改善围绝经期大鼠卵巢储备功能是否通过调控颗粒细胞凋亡蛋白表达来实现。2、探讨hUCMSCs移植后颗粒细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3及Bcl/Bax蛋白比值在不同时间的表达是否有变化。方法选取12-14月龄的SPF级SD大鼠40只,根据大鼠阴道涂片观察大鼠动情周期变化,筛选出30只动情周期紊乱的围绝经期大鼠作为模型,随机分为A组和B组(每组15只),另选取15只3-5月龄青年雌性SD大鼠作为C组,所有大鼠生活及喂养方式均一致。A组经尾静脉移植细胞缓冲液(PBS)1ml,隔日1次,共2次。B组经尾静脉移植浓度为1×10~6细胞/ml的hUCMSCs单细胞悬液1ml,隔日1次,共2次;C组不予任何处理。hUCMSCs移植后第2周、第3周、第4周每组随机抽出5只大鼠处死,卵巢组织进行免疫组化及western blot方法检测颗粒细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白及计算Bcl-2/Bax蛋白比值的变化。结果1.实验期间观察围绝经期SD大鼠一般情况,2组围绝经期SD大鼠精神、饮食、睡眠、毛色、活动等一般情况良好,未出现出血等免疫排斥反应及大鼠死亡情况。2.围绝经期SD大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2:(1)Western blot结果:hUCMSCs移植后第2周、第3周、第4周A组、B组的Bcl-2表达均低于C组,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。虽然B组表达高于A组,但是其差异在第2周、第3周无统计学意义(P>0.05),在第4周时差异有统计学意义(P<0.05)。B组移植后2周与移植后4周比较有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫组化结果:hUCMSCs移植后第2周、第3周、第4周A组、B组的Bcl-2表达均低于C组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。B组表达高于A组,但是在第2周、第3周差异无统计学意义(P>0.05),第4周的组间差异具有统计学意义(P<0.05)。B组移植后2周与移植后4周比较有统计学意义(P<0.05)。3.围绝经期SD大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Bax:(1)Western blot结果:hUCMSCs移植后第2周、第3周、第4周A组、B组的Bax表达均高于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。B组表达低于A组,但是在第2周、第3周差异无统计学意义(P>0.05),在第4周差异有统计学意义(P<0.05)。B组移植后2周与移植后4周比较有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫组化结果:hUCMSCs移植后第2周、第3周、第4周A组、B组的Bax表达均大于C组,结果均有统计学差异(P<0.05)。B组表达低于A组,但是在第2周、第3周结果无统计学差异(P>0.05),在第4周结果具有统计学差异(P<0.05)。B组移植后2周与移植后4周比较有统计学意义(P<0.05)。4.围绝经期SD大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比值:(1)Western blot结果:hUCMSCs移植后第2周、第3周、第4周A组、B组的Bcl-2/Bax表达均小于C组,结果均有统计学差异(P<0.05)。B组表达高于A组,但是在第2周、第3周结果无统计学差异(P>0.05),在第4周结果有统计学差异(P<0.05)。B组移植后2周与移植后4周比较有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫组化结果:hUCMSCs移植后第2周、第3周、第4周A组、B组的Bcl-2/Bax表达均小于C组,结果均有统计学差异(P<0.05)。B组表达高于A组,但是在第2周结果无统计学差异(P>0.05),在第3周、第4周结果具有统计学差异(P<0.05)。B组移植后2周与移植后4周比较有统计学意义(P<0.05)。5.围绝经期SD大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Caspase-3比值:(1)Western blot结果:hUCMSCs移植后第2周、第3周、第4周A组、B组的Caspase-3表达均高于C组,结果均有统计学差异(P<0.05)。B组表达低于A组,但是在第2周、第3周结果无统计学差异(P>0.05),在第4周结果有统计学差异(P<0.05)。B组移植后2周与移植后4周比较有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫组化结果:hUCMSCs移植后第2周、第3周、第4周A组、B组的Caspase-3表达均大于C组,结果均有统计学差异(P<0.05)。B组表达低于A组,但是在第2周、第3周结果无统计学差异(P>0.05),在第4周结果具有统计学差异(P<0.05)。B组移植后2周与移植后4周比较有统计学意义(P<0.05)。结论1.hUCMSCs移植围绝经期大鼠后通过上调卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达、降低Bax表达,提高Bcl-2/Bax蛋白比例,减少Caspase-3蛋白的表达水平,最终减少卵巢颗粒细胞凋亡。2.hUCMSCs移植围绝经期大鼠后第4周对卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白的调节比移植后第2周、第3周效果更为显著。