普切明酸（pulcherriminic acid）是衍生自环缩二亮氨酸（Cyclo（L-Leu-L-Leu）,cLL）,是一种由芽孢杆菌和酵母菌合成的环二肽,其结构中的异羟肟酸基团能够螯合四个三价铁离子形成红棕色的普切明（pulcherrimin）,使得产普切明酸的微生物能与周围其他微生物竞争铁离子,从而获取竞争优势达到抑菌作用。基于普切明酸的抑菌作用,使得其可成为一种有益物质或功能因子。课题组成员在中国白酒中已检测出普切明酸及其中间体或类似物（未发表数据）。本论文以课题组检测酒种的大曲、糟醅、窖泥为样品,经过初筛、复筛和形态学、理化性质和分子生物学等方法分离和鉴定目标菌株。以目标菌株为基因工程技术研究对象,分别对产普切明酸途径中的关键酶基因,即环二肽合成酶（YvmC）和细胞色素氧化酶P450（CypX）,进行PCR扩增、基因克隆和异源表达,并初步探讨了两种关键酶的结晶条件。本文主要研究结果如下:1.产普切明酸的目标菌株筛选:以某浓香型白酒的大曲、糟醅、窖泥为筛选对象,获取能产普切明酸的菌株;对目标菌株进行单菌种发酵,收集发酵产物,鉴定和分析获得一株最高产量的菌株Y1。经过分子生物学方法鉴定结果显示菌株为Bacillus subtilis Y1。2.产普切明目标菌株发酵条件优化:以菌株Y1和基本发酵培养基进行发酵,通过单因素实验和正交实验确定了最优的发酵培养基成分。正交实验获得菌株Y1普切明产量1230.32mg/L。菌株Y1最佳发酵条件为温度40℃,接种量2%,发酵时间36h,2L的发酵实验得到普切明酸产量为1332.12mg/L。3.yvmC和cypX基因片段获取与载体构建:PCR扩增得到yvmC和cypX基因,将yvmC和cypX基因分别与pET-28a质粒成功构建两个基因的重组质粒。4.yvmC和cypX基因异源表达与纯化:1)转化:yvmC和cypX基因的重组质粒分别转化到大肠杆菌BL21（DE3）菌株中进行异源可溶性表达;2)重组菌株最佳表达条件:yvmC最佳条件为18℃,12h,IPTG终浓度为1mmol/L,cypX最佳条件18℃,10h,IPTG终浓度为0.1mmol/L。5.YvmC蛋白和CypX蛋白结晶条件初探:1)YvmC以10mg/mL浓度进行浓缩,采用坐滴法对浓缩后的蛋白质进行结晶条件初筛,初步结晶条件为1.0M Sodium citrate-0.1M CHES pH9.5、24%PEG 1500-20%Glycerol,0.1M CHES pH9.5-50%PEG 200;2)CypX以8.9mg/mL的浓度进行结晶条件的摸索,未获得任何晶体结果。