SPR生物传感器用于DNA聚合酶与DNA结合的研究

来源 :中国科学院研究生院(上海微系统与信息技术研究所) | 被引量 : 4次 | 上传用户:wsdadoudou
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生物分子之间相互作用的动力学过程可以利用表面等离子激元共振(surface plasmon resonance,SPR)生物传感器进行研究。SPR技术克服了传统的生物分子相互作用动力学研究手段的局限性,能够实时地、对生物分子无损伤地检测溶液相的分析物和固定在传感芯片表面的配体之间的相互作用,实验中的分析对象不用标记。论文用SPR生物传感器研究DNA聚合酶和DNA的结合,主要研究了碱基错配对DNA聚合酶和DNA的结合以及DNA聚合酶#DNA#dNMP三元复合物形成的影响,抑制剂对DNA聚合酶和DNA结合的影响。另外,论文介绍了能够进行高通量SPR检测的SPR成像系统(SPM)的研制过程。 论文工作得到以下结果。 1.引物末端一个至多个的碱基错配影响了Taq聚合酶(Taq pol)和DNA模板-引物(DNA T-P)的结合,随错配碱基个数增多Taq pol和DNA的亲和力下降。SPR的动力学分析说明了“正确”的dNMP诱导酶-底物的构象变化,增加了DNA聚合酶(Taq pol、MMLV RT~-)和DNA结合的亲和力常数。“正确”或“错误”dNMP的存在大大增强了pol β和DNA的结合能力。 2.两种脂肪酸(亚油酸和神经酸)结合在人源pol β 8kDa结构域的DNA结合位点,从而竞争性抑制酶和DNA的结合。碳链较长的神经酸抑制酶和DNA结合的能力较亚油酸强。哌酸同样抑制pol β 8kDa结构域和DNA的结合,但是抑制能力较弱。槲皮素也能明显抑制pol β和DNA的结合,作用位点和酶的8kDa和31kDa两个结构域都有关联。 3.失去了核酸酶区域的鼠白血病逆转录酶(MMLV RT~-)和Ⅰ型人源免疫缺陷病毒逆转录酶(HIV-1 RT)和DNA的结合都存在构象变化。
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