本论文主要是对其中一个较特殊的候选靶基因一ATF3进行深入研究。 转录激活因子3(Activating TYanscription Factor 3，ATF3)是bZIP家族ATF/CREB亚家族的成员之一，能被多种诱导因子诱导的应激极早表达基因。ATF3含有典型的bZIP序列，依靠亮氨酸拉链结构形成二聚体发挥作用，当ATF3形成同二聚体时会抑制基因的表达，其具体的作用位点是第40-84位氨基酸序列，此序列是发挥抑制作用的活性部位，因此含有与该位点结合的启动子能被ATF3抑制；而当ATF3与ATF/CREB家族其他成员ATF2、c-Jun、JunB、或JunD等形成异二聚体时，依启动子和细胞状态发挥转录激活或抑制作用。所以，ATF3形成二聚体的形式决定了ATF3在细胞内发挥促凋亡还是抗凋亡作用，同时ATF3还能通过选择性剪接体ATF3Azip对靶基因的转录发挥间接调控作用。 ATF3对细胞凋亡进程的调控起着很重要的作用。在非神经元细胞凋亡时，ATF3在促凋亡和抗凋亡两方面的作用都有报道。在神经元损伤时ATF3被诱导上调，并且被认为是神经元损伤的标记指标；也有通过过表达ATF3的方法报道了ATF3对神经元具有保护作用。但是，作为一种由二聚体组成成分决定其调节功能的转录因子，过表达ATF3是不能揭示内源性的ATF3对神经元凋亡所起的作用。所以本研究利用RNA干扰技术，揭示内源性ATF3在撤钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡中的作用。同时，为了更进一步阐明过表达ATF3对神经元的保护作用，本文在过表达ATF3的基础上，探讨其发挥保护性干预神经元凋亡功能的可能机制。 第一部分c-Jun靶基因ATFl3促进小脑颗粒神经元凋亡 1，撤钾诱导小脑颗粒神经元凋亡时，JNK/c-Jun通路激活及ATF3表达上调将小脑颗粒神经元体外培养6天后，分别用25 mM KCI(25K)或5mM KCI(5 K)培养基处理0.5、1、2、4小时。收集蛋白后用磷酸化特异的JNK抗体检测JNK是否被激活。将体外培养了6天的小脑颗粒神经元分别共转染EGFP和空载体、shatf3a或shatt3b。在转染48小时后，换25K或5K.模型处理12小时，Hoechst33258染色。倒置荧光显微镜观察并拍照，细胞核固缩或碎裂记为凋亡细胞，以GFP阳性细胞数为总数，计算凋亡率。实验结果表明，转染了干扰质粒shatf3a或shatf3b的神经元5 K凋亡率明显降低。这些结果表明：干扰ATF3保护性地干预撤钾诱导的小脑颗粒神经元的凋亡。 第二部分过表达ATF3保护性干预小脑颗粒神经元凋亡 结论: 1，JNK/c-Jun介导了ATF3在撤钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡中的表达上调2，上调的内源性ATF3促进了小脑颗粒神经元的凋亡3，过表达ATF3保护性干预撤钾诱导的小脑颗粒神经元的凋亡4，过表达ATF3促进神经元的存活有可能是通过抑制JNK/c-Jun通路实现的