肝脏缺血再灌注损伤(hepaticischemiareperfusioninjury，HIRI)的发病机制非常复杂，涉及的环节和因素很多，治疗也相当棘手。长期以来，人们通过单一细胞因子对抗治疗HIRI、阻断MODS或MOF发展效果并不理想。目前，临床对因HIRI所致的肝功能受损甚至肝细胞凋亡等除用蛋白酶抑制剂或糖皮质激素作为常规治疗外，尚无其它较理想的治疗手段。因此，寻找新的治疗方法，对治疗缺血再灌注损伤及一系列的并发症、有效的控制HIRI的发生和发展有着极其重要的作用。 肝脏缺血再灌注损伤过程中，由于缺血引起的细胞缺氧以及细胞能量物质的缺乏导致肝细胞DNA的损伤和细胞凋亡或胀亡的发生；肝脏缺血再灌注后，氧自由基大量产生、脂质代谢障碍和致炎细胞因子产生增多等，导致再灌注后细胞凋亡的进一步增加。Sasaki等报道HIRI过程中，细胞的死亡以凋亡为主。因此寻找新的治疗方法，对抗肝脏缺血再灌注损伤和细胞凋亡有着重要的意义。 在抑制肝脏缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡的众多研究中，已证实蛋白水解酶抑制剂、抗氧化剂、NO、CO、HO-1和抗凋亡基因治疗等取得了一定的成效。瘦素是一种多靶器官、功能广泛的蛋白激素，具有多种生理功能，包括抑制摄食、增加能量消耗外，还具有调节生长发育、炎症和免疫功能；促进上皮细胞、血管生长等重要作用。已有研究证实Leptin在急性炎症反应造成的组织损伤中发挥重要的作用，并能减轻肠缺血再灌注损伤大鼠肝脏功能的损害。在抑制肝细胞凋亡的研究，国内戴锴等研究发现瘦素能抑制化疗药物诱导的肝细胞凋亡，是通过上调抗凋亡基因Bcl—2的表达和抑制促凋亡基因Bax的表达实现抗凋亡的作用。但瘦素是否具有抑制肝脏缺血再灌注损伤引发的肝功能受损或细胞凋亡？以及其可能的作用机制如何？目前尚未见报道，很有必要就此问题进行研究，探讨Leptin抗肝脏缺血再灌注损伤的可行性。 鉴于此，本研究将探讨瘦素是否对缺氧复氧培养的人L02肝细胞是否有保护作用，以及其保护作用的可能机理。 研究分为两个部分进行：1.在缺氧复氧状态下培养人L02肝细胞，复制肝脏缺血再灌注损伤模型，研究不同缺氧时间复氧后肝细胞存活率和肝功能改变及不同浓度瘦素对缺氧复氧培养L02肝细胞存活率影响、肝功能改变及形态学变化，探讨瘦素是否具有保护作用；2.通过缺氧复氧培养人L02肝细胞，研究不同浓度瘦素对细胞凋亡形态学、氧化应激产物生成、炎症因子的分泌、凋亡相关基因及蛋白的表达和H0-1基因及蛋白表达的影响，进一步探讨瘦素对缺氧复氧培养L02肝细胞的保护作用和机制研究。 第一章瘦素对不同缺氧复氧时间L02肝细胞存活率的影响 目的：本实验利用缺氧复氧培养L02肝细胞，研究不同缺氧时间细胞存活率的变化及不同浓度瘦素对缺氧复氧L02细胞影响。 结论: 1.缺氧复氧培养L02肝细胞会导致细胞存活率下降和细胞损伤；随着缺氧时间的延长，L02肝细胞存活率逐渐下降，以缺氧12h细胞存活率下降最明显(76.01％)； 2.缺氧复氧培养会引起L02肝细胞ALT和AST水平上升，不同浓度瘦素预处理后ALT和AST水平下降，提示瘦素对缺氧复氧培养的L02肝细胞肝功能有保护作用； 3.瘦素对经缺氧复氧培养后的L02肝细胞有保护作用，以400μg/LLEP浓度组保护效果明显，能增加缺氧复氧后L02肝细胞的存活率，保护肝功能，减轻肝细胞凋亡的形态学改变。 第二章瘦素对缺氧复氧培养L02肝细胞凋亡影响 目的：本研究拟采用不同浓度的瘦素对缺氧复氧培养的L02肝细胞进行预处理，观察细胞凋亡改变。 结论: 1.缺氧复氧培养L02肝细胞引起细胞凋亡形态学改变和增加细胞凋亡率； 2.不同浓度瘦素预处理后细胞凋亡形态学改变减轻，细胞凋亡率下降，以400μg/LLEP作用明显。 第三章瘦素对缺氧复氧培养L02肝细胞保护作用的机制研究 目的：本研究拟采用不同浓度的瘦素对缺氧复氧培养的L02肝细胞进行预处理，观察瘦素保护作用的可能机制。 结论： 1.瘦素能够增加增加缺氧复氧培养L02肝细胞SOD和总抗氧化能力产物的生成，减少MDA和羟自由基水平。 2.瘦素减少缺氧复氧培养人L02肝细胞TNF—α和IL—6的水平，减少致炎症反应因子的生成；且在低中浓度组作用明显。 3.瘦素能增加缺氧复氧培养L02肝细胞的抑制凋亡基因Bcl—2的表达，减少促发凋亡基因Bax、、Fas和FasL表达，下调Fas蛋白的表达，且在低中浓度组作用明显，表明瘦素的作用是通过Fas受体和配体、Bcl—2家族基因等信号传导通路实现的。 4.瘦素能增强缺氧复氧培养L02肝细胞的HO-1基因和蛋白的表达，证实了瘦素对缺氧复氧培养L02肝细胞的保护作用可能与HO-1信号转导通路有关。