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经过超过半个世纪的努力,儿童急性淋巴细胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL)的治疗效果得到了长足的进步,儿童ALL的总体治愈率,由二十世纪60年底的低于10%总体生存率,到现在基本达到80%左右。在欧美发达国家,个体化精准和系统性治疗(如药物动力学和药物基因学)使得儿童ALL治愈率已超过90%。随着生物医学技术的显著进步,现阶段儿童ALL治疗的焦点正从强调整体治愈率转向强调精准化治疗以及个体化治疗,提高白血病患者的生存质量。 传统化疗药物相关引起的毒副作用或相关性死亡、继发性肿瘤及复发是目前白血病治疗过程中亟需要解决的临床问题。目前临床一线抗ALL白血病细胞药物可以大致分为三类: 1、直接损害DNA类药物(蒽环霉素和烷基化剂); 2、抗代谢物(如甲氨蝶呤、巯嘌呤类药物、阿糖胞苷); 3、转录后作用药物(长春新碱、糖皮质激素和天冬酰胺酶)。由于常规化疗药物的作用非特异性,因此他们都存在着潜在的毒副反应,这些毒副作用都能严重影响患儿预后的远期生存质量,甚至危及生命。包括如:胰腺炎(天冬酰胺酶)、骨坏死(糖皮质激素)、骨髓抑制(蒽环霉素、烷基化剂)和继发性肿瘤(足叶已甙)等。 越来越多的研究成果提示:恶性肿瘤的发生发展除了与基因组异常密切相关,异常的表观遗传修饰也同样扮演者重要角色,并可能成为潜在治疗靶点。 表观遗传修饰,是指基因组DNA序列不发生改变的情况下,由于细胞核内染色质结构的变化,引起基因表达水平与功能的改变,主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA等。众所周知,基因的组蛋白修饰特征(如乙酰化、甲基化、磷酸化,泛素化)与其生物学功能密切相关,其修饰特征的变化也将引起组蛋白结构产生相应变化,导致染色体结构改变,最终引起生物学功能异常。 组蛋白乙酰化属于目前研究比较深入的表观遗传修饰,稳定的乙酰化水平主要取决于组蛋白乙酰化酶(Histone acetylase,HAT)和组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylase,HDAC)之间的相互协调作用。HAT,将乙酰辅酶A乙酰基部分转移到核心组蛋白氨基末端上特定赖氨酸残基的ε-氨基基团,有利于DNA构象的展开,使染色质处于松弛的状态,增强转录基因区域的活性。HAT异常与恶性肿瘤的发生密切相关,由于染色体异位、倒置等造成HAT活性的异常而引起基因表达的异常,在急性白血病发生和发展中十分重要。HDAC通过对组蛋白去乙酰化调节,移去组蛋白赖氨酸残基上的乙酰基团,使DNA结构更加紧密,抑制转录水平,从而导致基因的表达下降甚至不表达。此外,HDAC能够被某些肿瘤融合基因、肿瘤蛋白复合物的特定基因启动子区域异常招募,从而抑制细胞正常分化,促使白血病的发生。HAT/HDAC的失衡也对药物反应性产生影响。 越来越多研究提示:HDAC抑制剂能特异性杀伤肿瘤细胞,其中个别抑制剂已经获得FDA批准在临床上应用。如:Vorinostat、Belinostat、Romidepsin和Chidamide等药已经正式属于淋巴瘤临床化疗用药,并且在其他血液肿瘤,如AML、CML等白血病中,也表现出明显抗肿瘤活性。Panobinostat(pan-HDAC inhibitor)作为新型广谱的HDAC抑制剂,对I类HDAC、II类HDAC以及IV类HDAC均表现抑制作用。在实体瘤和血液肿瘤的的研究中表明Panobinostat同样具有明显的抗肿瘤活性,主要是通过增加组蛋白或/和非组蛋白乙酰化水平和HSP90等水平。Panobinostat不仅单独对白血病细胞造成杀伤作用,通过其他化疗药物联合使用更能逆转白血病细胞的耐药,增强白血病细胞对化疗药物的敏感性。更重要的是,Panobinostat与其他类型的HDAC抑制剂相比较,达到杀伤肿瘤细胞的药物浓度更低,高浓度的Panobinostat对正常的造血细胞几乎没有影响。这些资料提示Panobinostat在治疗急性淋巴细胞白血病中可能具有理想的临床转化前景。 因此,本研究对Panobinostat在儿童急性淋巴细胞白血病细胞的作用进行探讨。本课题首先利用ALL细胞基因表达谱、全外显子测序等高通量数据对ALL组蛋白乙酰化修饰特征相关基因进行特征分析;与此同时,我们利用初发儿童急性淋巴细胞白血病细胞作为研究对象,对Panobinostat的半数杀伤浓度进行实验并关联Panobinostat反应性与儿童ALL的临床特征。 研究目的: 1.明确ALL组蛋白乙酰化修饰特征; 2.初步探讨Panobinostat对初诊儿童ALL的作用及其特点; 3.关联Panobinostat反应性与儿童ALL临床特征; 研究方法: 1.收集相关ALL表达谱数据,外显子测序数据等高通量数据进行ALL组蛋白乙酰化修饰相关基因特征分析描述; 2.利用MTT实验研究Panobinostat对初诊ALL细胞的抑制作用; 3.收集ALL初诊时相关临床资料,进行关联性分析; 研究结果: 1.不同基因型ALL患者中存在HDAC的表达,不同HDAC亚型之间的表达水平具有差异性; 2.不同的初诊ALL细胞对Panobinostat的反应性不同,大部分(83.3%)患者Panobinostat的IC50低于1000nM,少部分(16.7%)患者Panobinostat的IC50高于10uM以上; 3.根据ALL患者初诊临床特征分析,患者的年龄、细胞与基因型不具有相关性与Panobinostat的反应性不存在相关性,Blast%与Panobinostat的反应性存在相关性。 研究结论: 1.原代ALL细胞中存在HDAC表达情况,不同类型ALL细胞中HDAC表达也具有差异性; 2.ALL患者中HDAC2/4/7/9高表达,正常骨髓中HDAC3/8高表达,此外HDAC基因突变频率低; 3.Panobinostat对原代初发ALL细胞具有抑制作用,并且原代初发ALL细胞对Panobinostat的反应性具有浓度差异、个体差异性; 4.ALL患者幼稚细胞比例Blast%与Panobinostat的反应性具有相关性。