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目的:研究PI3K/AKT、MAPK/ERK1/2和IKK/NF-κB信号通路以及bcl-2、bcl-xL和bax基因在介导EBV编码的BARF1基因调控鼻咽癌细胞凋亡中的作用。
方法:以pSG5载体稳定转染的鼻咽癌细胞系CNE1(CNE-pSG5)为对照，采用Hoechst33342染色法和活细胞计数法分析BARF1稳定表达的CNE1细胞（CNE-BARF1）在抗肿瘤药顺铂存在下细胞凋亡的状况，荧光抗体染色法分析NF-κBp65蛋白的核转位，免疫印迹法分析IKK、IκB、AKT和ERK1/2的磷酸化，以及Bcl-2、Bcl-xL和Bax蛋白的表达水平。进而分别采用IKK/NF-κB、PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2的特异性抑制剂Bay11-7082、LY294002和U0126处理CNE-BARF1细胞后重新分析以上指标的变化。
结果:与CNE-pSG5对照细胞相比，CNE-BARF1细胞中顺铂诱导的细胞凋亡率显著降低(P＜0.05)，细胞生存率显著提高(P＜0.05)。细胞中发生明显的NF-κBp65核转位，同时IKK、IκB、AKT和ERK1/2的磷酸化水平显著提高(P＜0.05)，Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达量显著增加（P＜0.05），而Bax减少，但无统计学意义(P＞0.05)。采用Bay11-7082处理后，CNE-BARF1细胞中NF-κBp65蛋白的核转位明显减少，Bcl-2和Bcl-xL蛋白的表达量显著下降(P＜0.05)，而Bax升高，但无统计学意义（P＞0.05）。分别采用LY294002和U0126处理后，CNE-BARF1细胞中NF-κBp65蛋白的核转位均明显减少，同时IKK和IκB的磷酸化水平、以及Bcl-2和Bcl-xL蛋白的表达量显著下降（P＜0.05）。
结论:BARF1基因通过PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2途径激活了NPC细胞的NF-κB信号通路，上调了NPC细胞bcl-2和bcl-xL基因的表达，进而增强了其抗凋亡活性。