硝基苯降解菌Pseudomonas XN—1细胞质粒的提取和特性研究

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该论文在对菌株Pseudomonas XN-1降解硝基苯的特性及降解条件优化的基础上,研究了菌株细胞内所含有的降解性质粒,希望能为今后对这株菌在分子水平上降解硝基苯的特性研究打下一些基础.因为细菌的抗生素抗性往往是与质粒相关的,所以考察了这株菌对抗生素的抗性,结果表明,这株菌对氨苄青霉素有抗性,对氯霉素和四环素没有抗性.对于野生菌株的质粒提取,需要选择合适的提取方法,我们首先采用了细菌细胞质粒提取常用的碱裂解法,但是未取得理想的效果,只得到了许多破碎的质粒DNA片段.应用质粒检测的方法,对菌株细胞进行质粒检测,并对检测结果进行电泳分析,实验发现,菌体细胞中存在一个质粒,而且质粒较大.因此该文采用了适合于大质粒提取的SDS法,和文献中应用于硝基苯降解性质粒的提取方法,来尝试对菌株细胞进行质粒提取,这两种方法裂解反应温和,不会像碱裂解法那样,在裂解过程中损坏质粒,可以实现质粒提取的完整性.结果表明,应用这两种方法可以得到清晰完整的质粒带.对质粒DNA电泳结果的分析表明,该质粒的大小约为22kb左右.为了考察质粒的功能,进行了质粒消除实验,结果表明,质粒消除后的菌株细胞难以在硝基苯选择培养基上生长,表明这个质粒是与硝基苯的降解代谢过程有关的.同时实验表明,这个质粒与菌株抗生素的抗性没有关系.对菌株的自发突变株的研究表明,这些菌株在硝基苯选择培养基上的生长特性是与它们细胞中所含质粒的特性相关的.一株质粒含量较高的突变株在硝基苯选择培养基中的生长情况要好于其它菌株,其所含的质粒也略小一些,因此我们推测,某个质粒片段的缺失造成了质粒拷贝数的变化,从而影响了它的生长特性.
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