刚地弓形虫（Toxoplasma gondii,T.gongdii）是一种机会性的专性细胞内寄生的原虫,其可以广泛的感染哺乳动物和鸟类,包括人类。流行病学调查显示,在世界范围内,弓形虫分布广,发病率高。因此,弓形虫病的诊断对于弓形虫病的预防具有重要的意义。致密颗粒（dense granules）分泌的致密颗粒蛋白（dense granules proteins,GRAs）目前已鉴定到约有30种。其中有些致密颗粒蛋白已被证实是较好的弓形虫诊断抗原,更重要的是其中一些多态性的蛋白可用于弓形虫的血清学分型。本研究通过对弓形虫GT1虫株GRA15基因片段（编码52-635氨基酸肽段）的克隆表达与反应原性分析,发现弓形虫GT1虫株GRA15蛋白具有较好的反应原性,具体内容如下:GRA15_GT1基因片段的生物信息学分析采用生物信息学软件ORF Finder工具、Expasy工具、TMHMM Server v.2.0工具、NetPhos 3.1 Server工具、Phyre 2.0工具、PREDICTED ANTIGENIC PEPTIDES工具和DNAStar软件,对弓形虫GT1虫株GRA15蛋白质进行生物信息学分析。结果显示:GRA15_GT1基因片段的大小为1755 bp,含有25个ORF,编码584个氨基酸;该蛋白质的理论分子质量为60.835 kDa,为亲水性蛋白质;该蛋白质存在1个跨膜区、97个磷酸化位点和18个潜在的抗原表位。因此,预测GRA15_GT1蛋白具有较好的免疫原性。GRA15_GT1蛋白的表达利用ToxoDB数据库和NCBI数据库中公布的弓形虫GT1虫株GRA15基因序列设计一对特异性引物,并在其上下游分别加入Bam HⅠ和EcoRⅠ酶切位点。通过PCR扩增GRA15_GT1基因片段,连接到pGEX-6P-1载体中,并进行酶切及测序鉴定。将pGEX-6P-1-GRA15_GT1载体转化BL21感受态细胞,并诱导表达;通过SDS-PAGE和western blot方法进行表达验证。结果显示:双酶切结果和测序结果与预期结果相符。SDS-PAGE及以GST标签抗体为一抗进行western blot均有目的条带,比理论值稍大。因此,成功构建了pGEX-6P-1-GRA15_GT1载体,并得到纯化的GRA15_GT1融合蛋白。GRA15_GT1蛋白反应原性分析分别利用猪抗弓形虫（GJS虫株）阳性血清、本实验室收集的猪弓形虫阳性血清和兔抗弓形虫（RH虫株）抗体为一抗进行western blot,分析GRA15_GT1蛋白的反应原性。结果显示:以猪抗弓形虫（GJS虫株）阳性血清、本实验室收集的猪弓形虫阳性血清和兔抗弓形虫（RH虫株）抗体分别为一抗进行western blot的条带大小与GST标签抗体孵育后的条带大小一致。因此,GRA15_GT1蛋白具有较好的反应原性。