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本研究将rPA(K)(经突变去除PAI-1结合位点)cDNA克隆至原核表达载体pET-30a(+)中，构建了其新型原核表达体系，并对其优化表达、复性和纯化等条件进行了探索，以达到去除非目的片段、方便检测、利于纯化、节约成本的目的，从而为rPA(K)的规模化制备奠定了基础。实验结果如下：
一、利用PCR技术，获得了rPA(K)cDNA片段，将其克隆至pET-30a(+)载体，成功构建了新型rPA(K)原核表达载体pLrA(K)，实现了其初步表达。目的蛋白分子量约为43kD，与预期结果相一致。蛋白含量占菌体总蛋白的24.3％，蛋白平均密度为0.16。ELISA检测显示，表达产物与抗t-PA抗体呈特异性阳性反应，平均含量为210ng/mL。
二、运用均匀设计法对影响rPA(K)在大肠杆菌中表达的因素进行了优化，摸索出了最佳表达条件：当溶解氧为90％、IPTG终浓度为0.1mmol/L、IPTG诱导时间为5.3小时、培养基为HD、pH值为6.0、诱导温度为25℃时，rPA(K)的表达量最高，目的蛋白平均密度从0.16提高到0.48，比优化前提高了3倍。
三、采用不同的洗涤剂(脲、TritonX-100、乙醇)依次洗涤包涵体、并经硫酸铵沉淀，得到了纯度较高的包涵体。结果表明，经2M脲、0.1％TritonX-100、20％乙醇洗涤，15％硫酸铵沉淀后，包涵体的纯度由16.0％提高到56.6％。
四、采用稀释复性和透析复性两种方法对表达产物进行了复性，并比较了两种方法的复性效率。结果表明，采用透析复性法，rPA(K)的比活可达1.33×105IU/mg；采用稀释复性法，其比活可达1.06×105IU/mg。即透析复性的效率是稀释复性效率的1.25倍，因此前者的效果要好于后者。
五、利用S.TagTMrEK纯化试剂盒对目的产物进行了纯化，并对rEK和MgCl2两种洗脱剂的洗脱效果进行了比较。SDS-PAGE结果显示，以MgCl2洗脱后的产物，分子量未发生变化，仍为43kD；而以rEK洗脱后的产物，其纯度达到了72％，且分子量减小至约40kD，表明去除了融合蛋白中的非目的片段。