Ⅱ型糖尿病是一种病理机制复杂的代谢紊乱疾病,它和肥胖、高血压、高血脂、动脉粥样硬化等总是共同发生发展、紧密联系,并被合称为代谢综合症。目前研究显示,胰岛素抵抗,脂肪细胞和内皮细胞功能损伤之间,存在复杂的相互影响,而这可能就是联系代谢综合症各种疾病的共同病理基础。此外,研究发现一些抗Ⅱ型糖尿病药物(如罗格列酮)具有治疗其它代谢综合症疾病的潜力。这些研究成果为本课题提供了研究基础和新的方向——从代谢综合症角度研究Ⅱ型糖尿病,筛选和评价能同时治疗Ⅱ型糖尿病和其它代谢综合症疾病的药物。 本研究以脂肪细胞可分泌多种因子调控代谢、其功能失常是代谢综合症重要病理基础、及前脂肪细胞分化的机制和意义为理论依据,首次提出前脂肪细胞分化的形态变化,可作为抗Ⅱ型糖尿病乃至代谢综合症药物的筛选指标。同时从中药药理作用复杂广泛的特点出发,提出从代谢综合症角度筛选评价中药的有效成分。本课题的主要目的:利用前脂肪细胞建立药物筛选模型,筛选中药的活性成分,研究筛选出的药物和罗格列酮对代谢综合症核心病理因子的直接作用,从而证明筛选模型的准确性和有效性,并对药物的机制进行系统的研究。 建立体外大鼠前脂肪细胞分离、培养、诱导分化模型。建立对前脂肪细胞分化进行量化检测的计算机图象处理系统,并用酶标仪检测验证分析系统的准确性。以前脂肪细胞分化为指标,建立可筛选抗Ⅱ型糖尿病/代谢综合症药物的筛选模型。应用模型筛选中药中提取的活性成分,筛选出两个药物:葛根素和黄芪甲甙。它们和罗格列酮都能促进胰岛素诱导的前脂肪细胞分化,包括脂肪合成和脂肪细胞特异性脂肪酸结合蛋白(aP2)基因表达。 为验证模型筛选出的药物是否有改善胰岛素抵抗的作用,建立高浓度葡萄糖诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗模型,运用液体闪烁仪检测细胞对2-[~3H]-D葡萄糖的摄取。研究证明,罗格列酮和筛选出的葛根素、黄芪甲甙都有显著改善葡萄糖诱导的胰岛素抵抗的作用,并具有一定的剂量依赖关系。应用半定量的RT-PCR技术,检测药物对前脂肪细胞PPAR Y和Resistin基因表达的影响。结果显示,葛根素、黄芪甲甙和罗格列酮,都具有促进PPAR γ基因表达,抑制Resistin基因表达的作用,类似结果国内外未见报道。这表明两种药物的作用机制很可能和罗格列酮一样是通过作用于PPAR γ,进而调控和前脂肪细胞分化、胰岛素敏