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第一部分：不同温度热消融小鼠皮下移植性肝癌的实验研究目的：通过对小鼠皮下移植性肝癌进行不同温度的热生理盐水消融,观察小鼠生存时间、肝癌体积大小、消融灶内免疫细胞及热休克蛋白的变化,探讨诱导有效免疫反应的合适消融温度。方法：共120只C57BL/6J小鼠皮下种瘤成功后,随机分为50℃、60℃、70℃、100℃及对照组共5组,每组24只；7-12天后,肿瘤长径、短径约6～8mm时进行实验,在各组小鼠的皮下瘤内按各组温度注射不同温度热生理盐水0.15m1进行消融,每组各取6只观察小鼠生存时间,6只于第15日观察肿瘤大小变化及取下肿瘤标本做HE染色,同时计算肝癌残留率,6只于消融后第72小时取肿瘤标本做免疫组化CD4+细胞、CD8+细胞数两项指标检测,6只于消融后第24小时取肿瘤标本做免疫组化HSP70单项指标检测。结果：①小鼠生存时间：各组小鼠生存时间不全相等(P<0.05),50℃组生存时间较长,对照组最短。②肿瘤体积大小变化：各消融组体积均显著小于对照组(P<0.05)；与消融前肿瘤体积比较,50℃组是唯一一组较消融前肿瘤明显缩小的组别(P<0.05)。③HE染色结果：经HE染色证实,对照组标本中无肿瘤细胞坏死,肝癌残留率为100%；50℃组中1个标本可见肿瘤细胞残留,肝癌残留率为16.7%；剩余三组中每组2个标本可见肿瘤细胞残留,肝癌残留率为33.3%。④免疫组化结果：50℃组CD4+细胞数量显著高于其它各组(P<0.05),CD8+细胞50℃组与对照组之间无显著差异(P>0.05),但高于其它热消融组(P<0.05)；50℃C组CD4+/CD8+比值升高最为明显；HSP70标记指数热消融组均显著高于对照组(P<0.05),标记指数在各组中随温度升高而降低,即50℃组最高,对照组最低。结论：在热生理盐水消融皮下移植性肝癌的动物实验中,50℃左右的消融温度可能更有利于诱导产生更为强烈的主动免疫效应。第二部分：热消融联合消融灶周边注射CpG ODN对小鼠肝癌生长抑制作用的研究目的探讨热消融联合消融灶周边注射CpG ODN治疗对小鼠肝癌的影响以及继发免疫效应的抗肿瘤效果。方法建立Hepal-6小鼠皮下肝癌动物模型,随机分为100℃热消融治疗组,100℃热消融联合CpG ODN治疗组、CpG ODN治疗组和对照组,8只于接种肿瘤细胞后第7天、第14天给予治疗,测量小鼠肿瘤体积,观察荷瘤小鼠存活情况及消融灶内淋巴细胞和HSP70变化,另8只第7天给予治疗,30d后对侧接种等量肿瘤细胞,1月后处死,观察小鼠生存状况及对侧种瘤生长情况结果①各实验组小鼠观察期内死亡率均低于对照组(P<0.05),各实验组对侧均无肿瘤生长,对照组再接种肿瘤生长率为100%(3/3),两者相比,差异有统计学意义(P<0.05)；②各实验组小鼠与对照组相比,肿瘤体积显著缩小(P<0.05),联合治疗组肿瘤缩小更显著；③各实验组较对照组有较多淋巴细胞浸润(P<0.05),联合治疗组数量最多；④各实验组与对照组相比有更多HSP70表达(P<0.05),联合治疗组HSP70表达最多,与其余实验组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论CpG ODN对荷瘤小鼠具有明显的免疫增强作用,CpG ODN联合热消融能有效的治疗小鼠肝癌,且能有效的减少复发第三部分：瘤内注射MIP-3 α对小鼠肝癌生长抑制作用的研究目的探讨巨噬细胞炎症蛋白-3a (MIP-3a)能否在小鼠皮下肝癌灶内趋化、募集外周的树突状细胞(DCs),使之在原位有效地摄取并提呈肿瘤抗原,诱导针对肝癌细胞的特异性免疫应答,以达到控制肿瘤进展的目的。方法成功建立小鼠皮下肝癌模型后随机分为3组,第10天起分别向MIP-3α治疗组、PBS对照组小鼠皮下肿瘤内注射MIP-3α溶液(含MIP-3α0.2μm)及PBS 100μl,空白对照组小鼠不予任何处理。20天后取肿瘤组织,免疫组化法检测肿瘤内DCs、CD4+、CD8+细胞浸润情况,流式细胞术检测肿瘤内DCs浸润数量及其表型。另取部分小鼠建立模型,分组、治疗方法同前,治疗实验结束后持续观察,绘制肿瘤生长曲线并观察生存时间。结果① MIP-3α治疗组小鼠肿瘤内浸润的CD4+、CD8+细胞及DCs数量均显著高于其他两组。② MIP-3α治疗组小鼠肿瘤内浸润性DCs的CD80、CD86表达率显著高于其他两组(P<0.05)。③ MIP-3α治疗组小鼠肿瘤生长速率显著低于对照组(p<0.001),生存时间较对照组明显延长(p<0.05)。结论①瘤内注射MIP-3α可在小鼠肝癌病灶内趋化、募集外周的树突状细胞,使其摄取并提呈肿瘤抗原,有效诱导针对肝癌细胞的特异性免疫应答。②MIP-3α在小鼠皮下肝癌模型的局部微环境下可能具有促进树突状细胞成熟的作用。