基于药物反证的IgA肾病血瘀证血蛋白组学研究

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目的:在药物干预治疗后,运用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, SELDI-TOF-MS)技术来比较IgA肾病血瘀证患者服药前后(活血通脉胶囊)的血清蛋白表达差异,在比较:1、IgA肾病患者与正常人血清差异表达蛋白;2、IgA肾病血瘀证患者及非血瘀证患者血清差异表达蛋白的基础上,论证IgA肾病血瘀证的血清特异表达蛋白,从蛋白质水平为IgA肾病血瘀证的活血祛瘀治疗提供客观依据。方法:参照第二次全国肾病专题学术讨论会通过的《慢性原发性肾小球疾病中医辨证分型标准》,结合1988年血瘀证研究的国际会议制定的国际血瘀证诊断标准,并参考临床实验室凝血指标,对2011年10月~2013年2月在南京军区福州总医院肾内科门诊及病房住院肾病患者进行中医辨证分型。对辨证分型属于IgA肾病血瘀证的患者获得其同意后给予药物水蛭(活血通脉胶囊0.5g3/日)口服4周。运用蛋白质组学的方法(SELDI-TOF-MS技术及金属离子螯合蛋白芯片)分析各组病例血清蛋白质指纹图谱(包括IgA肾病血瘀证组14例,服药组10例,IgA非血瘀证组16例,非IgAN的肾病人群血清样本14例及正常对照组血液样本15例),筛选出血清差异表达蛋白,从实验指标水平论证水蛭对IgA肾病血瘀证改善作用:1、比较IgA肾病患者正常人血清蛋白质表达谱;2、比较IgA肾病患者血瘀证组与非血瘀证组血清蛋白质表达谱,在此基础上运用Biomarker Patterns Software (BPS软件)识别IgA肾病血瘀证的特异表达蛋白并建立诊断决策树模型;3、比较IgA肾病血瘀证组服用水蛭(活血通脉胶囊)前与服用后的血清蛋白质表达谱。结果:1、比较IgA肾病患者与正常人血清蛋白质指纹图谱数据,我们发现有30个蛋白质荷比峰有意义(P<0.05)。2、比较IgA肾病血瘀证患者与非血瘀证患者血清蛋白质指纹图谱数据,我们发现42个蛋白质荷比峰具有显著差异(P<0.05),将差异蛋白导入BPS软件筛选出7个诊断IgA肾病血瘀证的最佳标志物(M/Z分别为1092.71、1972.32、2687.74、3196.19、3249.02、8567.20、8713.48)。3、比较IgA肾病血瘀证患者服药前后血清蛋白质指纹图谱数据,发现15个蛋白质荷比峰具有显著差异(P<0.05)。4、在以上结果的基础上,发现发现M/Z分别为3249.02、8567.20、8713.48的蛋白可能为IgA肾病血瘀证的特异蛋白,结合手动筛选和组间方差分析的方式,我们发现M/Z为8713.48的蛋白有意义。结论:结合软件分析及手动筛选,我们发现:1、M/Z为8713.48的蛋白在IgA肾病血瘀证患者呈高表达;2、水蛭可能通过干预M/Z为8713.48的蛋白的表达来改善IgA肾病血瘀证情况。
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