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目的肝细胞癌(HCC)在我国有着极高的发病率和致死率,同时具有起病隐匿、发现晚、切除率低、根治后容易复发转移等特点,对我国人民的健康造成严重的危害并给社会带来沉重的负担,因此精准诊断及预后预警标记物、新型治疗靶标的寻找是目前HCC诊治中急需解决的问题。CacyBP/SIP蛋白是钙结合素结合蛋白,已知其在细胞分化、细胞周期调控、细胞骨架重建、蛋白质泛素化降解、肿瘤发生发展中发挥着重要作用。然而,CacyBP/SIP在肝细胞癌中的表达谱及其发挥的分子生物学作用却未曾有人探究。故此,本研究将围绕CacyBP/SIP蛋白在肝细胞癌中的表达谱和临床意义、对肝癌恶性生物学行为的影响及其分子机制做相应的探索。方法首先,我们分别采用免疫组化、荧光实时定量PCR、以及Western免疫印迹法检测若干肝细胞癌临床样本中CacyBP/SIP的表达情况,总结其表达谱并分析其临床意义。接着,我们利用慢病毒荷载shRNA构建稳定敲低的肝细胞癌细胞系,通过体外克隆形成、体内皮下成瘤、肝原位种植、以及尾静脉注射等方法检验CacyBP/SIP蛋白对肝癌细胞生长以及迁移侵袭的影响。其次,我们利用慢病毒荷载ORF构建稳定过表达的肝癌细胞系,采用同样的方法检测过表达CacyBP/SIP对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。在明确肝癌细胞中CacyBP/SIP的功能和表型后,我们采用Western免疫印迹检测CacyBP/SIP对肝癌细胞上皮间质转化的影响,紧接着我们采用ELISA试剂盒检测细胞上清中TGF-β 1的分泌水平,看是否通过促进TGF-β/Smad2/Smad3进而影响上皮间质转化。同时,采用加入蛋白质合成抑制剂,检测上皮间质转化重要诱导转录因子ZEB-1蛋白的降解情况。最后,我们采用细胞核、浆蛋白提取试剂,检测ZEB-1的入核情况。结果首先,我们发现在肝细胞癌手术切除临床样本中,肝癌组织中CacyBP/SIP mRNA和蛋白水平的表达均较相应的癌旁组织明显升高。同时,CacyBP/SIP的表达与肿瘤大小、血管侵犯、肝硬化、早期复发等密切相关,高表达CacyBP/SIP的肝癌患者,其预后越差。其次,我们发现,与阴性对照组相比,敲低CacyBP/SIP蛋白的肝癌细胞体外克隆形成、体内皮下成瘤大小、原位肝种植肺转移结节形成等明显减少;而过表达CacyBP/SIP蛋白的肝癌细胞与正常对照组相比,其体外克隆形成、裸鼠皮下荷瘤大小、尾静脉注射肺结节形成能力明显增强。接着,进一步的机制探索显示,敲低CacyBP/SIP蛋白后,上皮表型标记物E-Cadherin等明显增加,而间质表型标记物N-Cadherin、Vimentin等显著减少;反之,过表达CacyBP/SIP后,上皮表型标记分子表达减少,间质表型标记分子表达增加。检测细胞内以及细胞上清中的TGF-β 1蛋白水平,发现细胞内以及分泌TGF-β 1的水平随着敲低或者过表达CacyBP/SIP而发生相应的减少或增加。同时,随着CacyBP/SIP蛋白的敲低或过表达,TGF-β/p-Smad2/p-Smad3信号通路亦发生相应的抑制或激活。随后,我们又通过蛋白合成抑制剂放线菌酮处理检测ZEB-1蛋白的降解情况,发现CacyBP/SIP可以减缓ZEB-1的降解速率,使得细胞内ZEB-1蛋白水平升高,同时,Zeb-1入核亦相应增多。结论CacyBP/SIP在肝细胞肝癌中显著高表达,是一个肝癌中未曾有相关研究的新促癌基因。敲低CacyBP/SIP可抑制肝癌细胞生长、迁移和侵袭等恶性生物学行为,而过表达CacyBP/SIP能明显促进肝癌细胞侵袭性生长。同时,CacyBP/SIP可促进TGF-β1的产生和分泌,激活Smad2/Smad3信号通路,进而促使肝癌发生EMT转变。另外,CacyBP/SIP能够减少EMT重要诱导转录因子ZEB-1的降解,增加ZEB-1蛋白水平,协同促进肝癌细胞的EMT转变。可见,CacyBP/SIP在肝癌的恶性生物学行为中发挥着重要作用,未来有可能成为肝细胞癌诊断、预后预警的新型分子标志物和治疗的潜在作用靶点。