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第一部分胃癌组织ARID1A的表达水平与肿瘤免疫微环境的关系及其临床病理学意义目的:研究胃癌组织中ARID1A的表达情况,并分析其表达水平与免疫微环境的相关性及其临床病理学意义方法:收取华中科技大学同济医学院附属协和医院90例胃癌手术标本,通过免疫组织化学检测法评估胃癌组织中ARID1A的表达水平和CD8+T淋巴细胞的浸润情况,同时收取纳入研究患者的相关临床数据,分析ARID1A表达水平与临床病理学及肿瘤微环境中CD8+T淋巴细胞含量的相关性。结果:免疫组化检测90例胃癌组织发现,ARID1A高表达69例（76.7%）,ARID1A低表达21例（23.3%）。卡方检验发现ARID1A低表达与性别（0.025）、侵袭深度（0.049）、肿瘤TNM分期（0.005）、CD8+T淋巴细胞表达评分（<0.001）相关,但与年龄（0.145）,部位（0.732）,分化程度（0.732）,N分期（0.732）,淋巴结转移情况（0.110）及血管侵犯（0.148）无明显相关性。Pearson检验发现胃癌组织CD8+T淋巴细胞的含量与ARID1A的表达水平成正相关（p<0.0001）。结论:ARID1A低表达与肿瘤的深度侵犯侵犯及TNM低分期相关,提示不良的肿瘤学预后,胃癌组织CD8+T淋巴细胞的含量与ARID1A的表达水平成正相关,ARID1A低表达与胃癌组织中CD8+T淋巴细胞的含量减少存在相关性。第二部分ARID1A对胃癌肿瘤免疫微环境的影响目的:研究ARID1A表达水平对胃癌细胞肿瘤免疫微环境的影响及其机制方法:利用慢病毒转染胃癌细胞系构建ARID1A稳定敲低的AGS、SNU-1、SNU719、MFC细胞系,并用Western blot和q RT-PCR验证ARID1A敲低效率。利用qRT-PCR和ELISA分别检测ARID1A敲低后各胃癌细胞系Th1型趋化因子（CXCL9,CXCL10）m RNA和蛋白表达水平的变化,利用ARID1A敲低的MFC细胞构建ARID1A敲低的小鼠胃癌移植瘤模型,观察比较各组小鼠肿瘤平均体积的增长情况,评估各组小鼠肿瘤相关预后,利用流式细胞技术检测分析移植瘤中淋巴细胞的含量,利用免疫组化检测各组移植瘤的CD8+T淋巴细胞的浸润水平。结果:胃癌细胞ARID1A表达水平降低会下调人胃癌细胞系的Th1型趋化因子的表达水平,体内实验证实ARID1A敲低组小鼠的肿瘤平均体积增长较快,肿瘤学相关预后较差。胃癌细胞ARID1A低表达会导致肿瘤微环境中CD8+T淋巴细胞的浸润减少,削弱机体自身的抗肿瘤免疫效应。结论:胃癌细胞的ARIDIA基因表达水平下降通过减低胃癌细胞Th1型细胞趋化因子的表达导致肿瘤免疫微环境中CD8+T淋巴细胞含量减低,从而下调机体自身的抗肿瘤免疫效应。第三部分表观遗传学调控对ARID1A低表达胃癌的治疗作用及其相关分子机制研究目的:研究表观遗传学调控剂—HDAC抑制剂（LBH589）对ARID1A低表达胃癌的治疗作用及其分子机制方法:利用Western blot分析敲低ARID1A后胃癌细胞系的组蛋白乙酰化的表达水平变化情况。然后利用HDAC抑制剂LBH589处理ARID1A敲低的胃癌细胞系,并通过Western blot检测其乙酰化水平变化,利用q RT-PCR和ELISA检测经LBH589处理后ARID1A敲低型胃癌细胞系的Th1型趋化因子的表达情况。针对CXCL9,CXCL10启动子设计相应的引物,通过染色质免疫共沉淀实验检测LBH589处理后STAT1与CXCL9,CXCL10启动子的结合情况。利用免疫荧光染色检测LBH589处理后的胃癌细胞细胞核蛋白的相关表达情况,分析其染色质性状变化情况,利用ARID1A敲低胃癌细胞建立小鼠移植瘤模型,通过体内实验室检测LBH589对ARID1A低表达胃癌的治疗效果,利用细胞流式技术检测各组肿瘤组织中T淋巴细胞的含量,以及TNF-α,IFN-γ的含量,评估LBH589对敲低组肿瘤的免疫微环境的影响。结果:ARID1A敲低的胃癌细胞其组蛋白乙酰化水平下降,LBH589能显著上调ARID1A敲低胃癌细胞系的乙酰化并上调Th1型趋化因子CXCL9,CXCL10的表达水平。染色质免疫共沉淀实验验证LBH589处理能促进STAT1与CXCL9,CXCL10启动子结合进而促进CXCL9,CXCL10表达。免疫荧光染色检测发现敲低胃癌ARID1A后,细胞核内异染色质-1α蛋白（HP-1α）蛋白表达上调,LBH589可使HP-1α蛋白表达下调。体内实验发现,LBH589能显著缩小ARID1A敲低组移植瘤的体积,改善其肿瘤学相关预后,细胞流式技术显示,LBH589能显著上调敲低组移植瘤组织中的T淋巴细胞含量,并上调TNF-α,IFN-γ的含量。结论:ARID1A表达水平下降会导致组蛋白乙酰化水平下调,引起染色质性状改变,导致核小体关闭,编码Th1型趋化因子的相关基因的“可及性”下调,从而引起Th1型趋化因子的表达水平减低。HDAC抑制剂LBH589通过逆转这一表观遗传学变化,上调ARID1A敲低胃癌细胞的组蛋白乙酰化水平,使ARID1A敲低的胃癌细胞核染色质重新开放,恢复关键基因的“可及性”,从而恢复CXCL9,CXCL10的表达。体内实验证实LBH589能有效上调肿瘤微环境中CD8+T淋巴细胞含量,改善敲低组胃癌免疫微环境的的免疫抑制状态,从而治疗ARID1A低表达胃癌第四部分表观遗传学调控增强ARID1A低表达胃癌对PD-L1抗体的治疗反应性目的:研究HDAC抑制剂（LBH589）联合PD-L1抗体对ARID1A低表达胃癌的治疗作用,探讨表观遗传学治疗对免疫检查位点抑制剂的增敏作用。方法:分别利用ARID1A敲低小鼠胃癌细胞及其空泡对照病毒转染细胞构建具有完整免疫功能的小鼠胃癌移植瘤模型,体内水平评估PD-L1联合LBH589对ARID1A敲低型胃癌细胞的治疗作用,分析比较单药治疗和联合用药的治疗效果。结果:单用免疫检查位点抑制剂PD-L1抗体对ARID1A敲低组的治疗效果不佳,联合HDAC抑制剂LBH589能显著上调肿瘤微环境中T淋巴细胞的含量。显著缩小敲低组小鼠肿瘤体积,提高肿瘤学预后。结论:HDAC抑制剂—LBH589通过调控ARID1A低表达胃癌的表观遗传学变化,恢复Th1型趋化因子的表达水平,从而上调肿瘤组织CD8+T淋巴细胞的含量来增强肿瘤细胞对免疫检查位点抑制剂PD-L1抗体的治疗反应性。