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鸡球虫病是由艾美尔属球虫引起的一种胞内寄生虫病,其中,柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella,E.tenella)的致病性较强,感染鸡通常出现体重减少、盲肠损伤、便血和死亡等症状,给养殖业带来巨大的经济损失。目前,许多抗球虫药已经被用于鸡球虫病的防治,但是由于耐药性的产生使得药效明显下降。此时,迫切需要寻找开发新型抗球虫药来弥补已经出现耐药性的旧药。沙咪珠利(Ethanamizuril,EZL)和纳川珠利(Nitromezuril,NZL)是本实验室自主合成的两种新型三嗪类抗球虫化合物,前期研究表明二者均具有广谱、高效、低毒的特点,具有很好的开发前景。本论文在前期实验室研究的基础上,研究了纳川珠利对E.tenella超微结构的影响以及沙咪珠利和纳川珠利对E.tenella第二代裂殖子14种基因mRNA转录水平以及对两种表面抗原蛋白表达的影响,以期寻找药物的作用阶段和作用靶标。结果如下:1.在研究纳川珠利对E.tenella超微结构的影响时,分别在感染后不同时间点单次给予10mg/kg纳川珠利溶液,给药后16小时剖杀,并与感染对照组进行对比分析。结果表明,纳川珠利对裂殖阶段和配子阶段均有影响:在裂殖阶段,纳川珠利能够抑制裂殖体的分裂,减少裂殖子的数量,并导致裂殖子内部微线和线粒体数目减少,棒状体消失,淀粉颗粒聚集,外膜外翻,细胞浆空泡化等异常;在配子阶段,纳川珠利能够使小配子母细胞染色质浓染、边缘化,核膜消失,大配子母细胞成壁体肿胀溶解等。2.为研究沙咪珠利和纳川珠利对E.tenella第二代裂殖子差异蛋白表达过程中基因水平的影响,从Label free鉴定出的上调和下调蛋白中分别选择7种进行基因水平的验证。以β-actin作为内参基因,运用Real-time PCR检测上述蛋白mRNA转录水平的表达,结果表明,选择的蛋白基因水平的表达结果与Label free结果基本上一致。这14种基因主要参与虫体的糖酵解、氧化还原、蛋白质合成、细胞骨架等,推测沙咪珠利和纳川珠利可能通过干扰虫体代谢以及虫体结构来达到抗球虫作用。3.为研究药物对第二代裂殖子外膜的影响,选择基因水平明显下调的两种表面抗原基因SAG19(Q70CD0)和SAGfm(U6L233),利用RT-PCR的方法扩增全长,与p GEM-T easy载体连接,扩增目的片段后分别双酶切扩增产物与pET-28a(+),连接转化至BL21后,诱导表达,分别获得两种重组蛋白。SDS-PAGE结果表明,两种重组蛋白的分子量均约为32kd,为包涵体蛋白。分别以感染柔嫩艾美耳球虫的鸡血清和用重组蛋白来免疫兔子获得的多克隆抗体作为一抗,利用Western blot分析,结果表明重组蛋白具有良好的反应性和抗原性。4.运用Western-blot、免疫荧光检测沙咪珠利和纳川珠利对第二代裂殖子两种表面抗原基因蛋白水平的影响。Western-blot结果表明,两种药物均能显著降低两种基因蛋白水平的表达。免疫荧光分析结果显示,两种表面抗原蛋白分布在整个裂殖子的表面,且与对照组相比,加药组两种药物作用后两种表面抗原蛋白荧光强度明显减弱。综上所述,同沙咪珠利一样,纳川珠利对E.tenella裂殖阶段和配子阶段的超微结构均有作用,对细胞膜作用尤为明显。同时,两种药物均能显著上调或者下调多种基因的转录,并能显著抑制两种表面抗原蛋白基因蛋白水平的表达,推测这两种表面抗原蛋白可能为药物的作用靶标。