化学多元分析结合光谱和色谱仪器对小分子的定量应用研究

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能产生多元数据的各类新型分析仪器为分析工作者提供了大量丰富的量测数据,从这些量测数据中提取有用信息解决分析化学实际问题是分析化学领域的研究重点之一。化学计量学方法的主要目标之一是从这些复杂数据中提取有用信息,用于快速、准确地解决定性与定量分析等难题,是当前前沿研究领域之一。本学位论文的研究工作主要基于光谱和色谱仪器数据,利用化学多元分析方法对复杂体系中的目标组分进行准确、抗干扰定量分析,主要包括以下内容:在第2章中,本论文以废弃烟叶为碳源,通过水热法合成了一种新的碳点(CDs(WTL))。CDs(WTL)具有良好的水溶性、稳定性以及较高的荧光量子产率。四环素(Tetracycline,TC)对CDs(WTL)的荧光强度有明显的猝灭作用,但存在明显的光谱位移。为了利用CDs(WTL)作为荧光探针对四环素进行准确定量,本论文引入了荧光定量模型(Quantitative fluorescent mode,QFM)来克服这一在利用碳点作为荧光探针定量领域经常发生的光谱位移效应。本论文分别使用传统单变量定量模型(Traditional quantification model,TQ)、偏最小二乘法(Partial least squares,PLS)和QFM进行建模分析,决定系数(The coefficient of determination,R~2)分别为0.9672、0.9834和0.9991;对于河水加标样,TQ、PLS和QFM的平均相对预测误差分别为8.8%、4.5%和3.9%,对于药片加标样,TQ、PLS和QFM的平均相对预测误差分别为21.9%、22.0%和2.9%。结果表明,QFM比PLS和TQ对四环素的检测更准确。利用QFM方法分析三个厂家的四环素药片样品获得的平均回收率(均值±标准偏差)分别为98.9±3.6%、102.5±6.2%和98.5±2.7%;分析河水样品获得的平均回收率(均值±标准偏差)为99.4±5.0%。此外,以高效液相色谱(HPLC)作为参考方法,F检验和t检验表明,在5%的显著性水平下,本文建立的CDs(WTL)结合QFM法与HPLC法在精密度和准确度上均无显著差异。在第3章中,本论文建立了一种基于交替三线性分解(Alternating trilinear decomposition,ATLD)算法的HPLC-DAD二阶校正方法,用于快速、同时测定婴幼儿配方奶粉样本中的腺苷-5’-单磷酸(AMP)、鸟苷-5’-单磷酸(GMP)、胞苷-5’磷酸(CMP)、5’-尿苷酸(UMP)和肌苷-5’-磷酸(IMP)五种核苷酸。即使存在复杂的未知干扰、严重的色谱峰重叠和一定程度的保留时间漂移,该方法依然实现了对这五种核苷酸物质的定量分析。CMP、UMP、GMP、IMP和AMP的校正集、验证集和预测集的分析结果都非常令人满意,平均回收率(均值±标准偏差)分别为97.4±4.2%、87.9±1.2%、96.2±3.9%、99.7±5.9%和92.4±1.1%。在预测样(真实样本)中预测出的核苷酸总含量与GB 14880-2012《食品安全国家标准食品营养强化剂使用标准》中规定的允许添加的使用量一致。CMP、UMP、GMP、IMP和AMP的检测限(Limit of detection,LOD)分别为0.03μg m L-1、0.09μg m L-1、0.22μg m L-1、0.30μg m L-1和0.15μg m L-1,定量下限(Limit of quantitation,LOQ)分别为0.08μg m L-1、0.28μg m L-1、0.66μg m L-1、0.91μg m L-1和0.46μg m L-1。另外,以基于高效液相色谱(HPLC)的标准曲线法作为参考方法对AMP进行定量分析,F检验和t检验表明,在5%的显著性水平下,两种方法预测的结果之间没有显著性差异。本研究中令人满意的结果表明,二阶校正方法辅助HPLC-DAD分析是一种很有前景的分析方法,不但可以减少洗脱时间还可以提高HPLC-DAD的选择性。在第4章中,本论文提出了一种基于紫外可见光谱仪的三维校正方法,用于直接定量分析细胞样本中核酸的单体,即AMP、GMP、CMP和UMP四种核苷酸。首先,通过在紫外可见光谱中引入p H维度,构建了每个样品的光谱-p H二阶数据。然后,将校正样、验证样和预测样的光谱-p H数据堆叠构建三维数据阵列,通过三线性分解,从混合信号中提取出了AMP、GMP、CMP和UMP的纯信号。在此基础上,建立了一种新的三维校正方法,用于直接定量分析细胞样本中的四种核苷酸物质。尽管存在未校正的干扰,AMP、GMP、CMP和UMP的平均回收率(均值±标准偏差)分别为104.5±4.2%、96.7±8.0%、99.8±1.4%和95.9±4.5%。实验结果表明,本论文建立的光谱-p H二阶校正方法具有较高的数学选择性,可以增强紫外-可见吸收光谱仪在复杂分析系统中实现抗干扰定量分析的能力。
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