论文部分内容阅读
目的通过建立慢性间歇性缺氧SD大鼠动物模型来研究阻塞性呼吸暂停综合征促进认知功能障碍的机制,研究慢性间隙性缺氧对RAGE、LRP1蛋白在大鼠血脑屏障中表达的影响,探讨它们在慢性间歇性缺氧造成认知障碍过程中的作用。方法选取50只SD(Sprague- Dawley)成年雄性大鼠,随机分为慢性间歇性缺氧组( chronic intermittent hypoxia group ,CIH)20只、空白组( unhandled control group,UC)15只和空气对照组(air control group,AUC)15只,UC组正常饲养,AUC组放置密闭箱内但不缺氧给予空气(为了排除间歇性缺氧时二氧化碳潴留因素的干扰), CIH组放置于缺氧舱内每日间歇缺氧8小时,建立慢性间歇性缺氧模型。8周结束实验,所有大鼠在实验结束后进行Morris水迷宫测试,检测其学习记忆能力。采用免疫组织化学技术(PV-9000二步法)检测RAGE、LRP1蛋白在间歇性缺氧处理的大鼠和对照组大鼠血脑屏障中的表达情况,应用Image-ProPlus图像分析软件测定免疫组化图像的平均光密度(Mean Optical Density, MOD),运用SPSS 17.0软件进行统计学分析。结果(1)Morris水迷宫成绩:①定位航行实验:第5天训练结束时,CIH组大鼠逃避潜伏期明显长于UC组及AUC组,之间差异有统计学意义(P<0.05);而UC组与AUC组的逃避潜伏期无显著差异(P﹥0.05);②空间搜索实验: CIH组首次达原平台时间较UC组及AUC组均明显延长(p﹤0.05,分别为0.031,0.010);CIH组明显比UC组及AUC组穿越原平台次数少,(P﹤0.0125,分别为0.007,0.004) (ɑ′=0.0125)。(2)①RAGE蛋白在CIH组大鼠微血管内皮细胞和胶质细胞阳性表达率为70%,明显高于UC组和AUC组大鼠中的表达率(26.7%;33.3%),两者差异有统计学意义(P<0.05); CIH组RAGE表达水平(MOD值)(0.0538±0.0075)明显高于UC组和AUC组,差异有统计学意义(P<0.05)。②CIH组大鼠微血管内皮细胞和胶质细胞LRP1蛋白表达率为25.5 %,较UC组和AUC组大鼠中的表达率(66.7%,60%)明显下降,( P<0.05)。(3)RAGE表达与大鼠水迷宫成绩相关性:RAGE与大鼠逃避潜伏期呈正相关( r=0.658,P<0.05);与大鼠首次达原平台时间呈正相关(r=0.328,p<0.05);与穿越原平台次数呈负相关(rs=-0.488,p<0.05)。(4)LRP1表达与大鼠水迷宫成绩相关性:LRP1与大鼠逃避潜伏期呈负相关(r=-0.483,p<0.05);与大鼠首次达原平台时间呈负相关(r=-0.484,p<0.05);与穿越原平台次数呈正相关(rs=0.643,p<0.05)。结论1、经过慢性间歇性缺氧后,大鼠的空间学习、记忆能力均匀明显下降,说明慢性间歇性缺氧对大鼠的认知功能具有一定损坏作用。2、经过慢性间歇性缺氧处理后RAGE蛋白在血脑屏障微血管内皮细胞和小胶质细胞的表达明显高于未经慢性间歇性缺氧的表达,提示其在慢性间歇性缺氧可能会上调RAGE基因的转录或表达。3、经过慢性间歇性缺氧处理后LRP1蛋白在血脑屏障微血管内皮细胞和小胶质细胞的的表达明显低于未经慢性间歇性缺氧的表达,提示其在慢性间歇性缺氧可能会下调LRP1基因的转录或表达。4、RAGE在血脑屏障微血管内皮表达与大鼠认知障碍程度呈正相关,提示RAGE可能在认知功能损害的发生、发展过程中起促进作用。LRP1表达与大鼠认知障碍程度呈负相关,提示LRP1蛋白可能对认知功能具有一定的保护作用。