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目的:目前对恶性肿瘤主要采取综合治疗的原则,放射治疗和化学治疗的结合是目前临床应用最为广泛的一种综合治疗模式。二者的结合应用能提高肿瘤疗效已在临床中得到证实,然而临床治疗中我们也可以观察到放射治疗后,肿瘤对化疗药物的敏感性下降,其机理尚不清楚。放射治疗会引起肿瘤细胞多药耐药基因及其蛋白的过度表达可能是导致肿瘤细胞对化疗药物敏感性降低的主要原因之一。本实验模拟临床常规分割放疗方法对鼻咽鳞癌CNE-1细胞进行分次X射线照射,检测X线照射前与照射后一段时间内鼻咽鳞癌CNE-1细胞对化疗药物顺铂(cisplatin,DDP)敏感性的变化,同时检测X线照射前后多药耐药基因(multidrug resistance gene,MDR1)及其编码产物P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白基因(multidrug resistance-associated protein gene,MRP gene)及其编码产物多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)的表达随时间的变化情况,探讨照射与鼻咽鳞癌CNE-1多药耐药性的关系。方法:对人鼻咽鳞癌CNE-1细胞进行体外培养,待细胞进入指数生长期后模拟临床放疗方法进行X射线常规分割照射,总剂量20Gy(2Gy/天/次,5次/周,持续2周)。分别于X射线照射前、照射开始的第7、14、21、28和35天收取标本进行检测。利用MTT法检测X射线照射前后顺铂(DDP)对CNE-1细胞的半数抑制率(inhibitory concentration of drug that reduces cell survival by 50%,IC50),RT-PCR检测X射线照射前后CNE-1细胞MDR1和MRP基因的表达,Western blotting方法检测X射线照射前后CNE-1细胞P-gp和MRP的表达。结果:MTT法检测X射线照射前CNE-1细胞的IC50值为1.11±0.05μg/mll ,照射开始第7、14、21、28和35天的IC50值均比照射前增高,其值分别为1.57±0.12μg/ml、2.65±0.15μg/ml、4.33±0.17μg/ml、3.72±0.19μg/ml和2.76±0.20μg/ml(P<0.05),差异有统计学意义,其IC50值在第21天最大,第21天后呈回落趋势。RT-PCR检测X射线照射前CNE-1细胞MDR1和MRP基因的半定量值分别为0.47±0.02和0.41±0.02,照射开始第7、14、21、28和35天MDR1和MRP基因的表达比照射前明显增高,MDR1值分别为0.60±0.03、0.90±0.08、1.03±0.09、0.80±0.05和0.67±0.02,MRP基因值分别为0.63±0.05、1.01±0.06、1.33±0.08、0.99±0.05和0.75±0.03(P<0.05)。Western blotting检测X射线照射前CNE-1细胞P-gp和MRP的半定量值分别为15.55±1.02和55.48±1.91,照射开始第14、21、28和35天P-gp表达比照射前明显增高,其值分别为26.98±1.62、35.12±2.11、29.85±1.83和23.35±1.84,第7、14、21、28和35天MRP表达比照射前明显增高,其值分别为71.13±3.4、93.60±3.95、100.75±3.67、106.17±4.06和89.12±3.05(P<0.05)。X射线照射后多药耐药基因和蛋白的表达随时间均呈现先增高后缓慢回落的趋势。结论:X射线照射前CNE-1细胞已存在较弱的耐药基因(MDR1、MRP基因)和耐药蛋白(P-gp、MRP)的表达,这说明鼻咽鳞癌CNE-1细胞已存在一定程度的原发性耐药;X射线照射后鼻咽鳞癌CNE-1细胞对化疗药物顺铂(DDP)的敏感性降低,对顺铂产生抵抗;X射线照射后鼻咽鳞癌CNE-1细胞多药耐药基因(MDR1)及其编码产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白基因(MRP基因)及其编码产物多药耐药相关蛋白(MRP)均在一定程度上较照射前显著增高,说明X射线照射导致了鼻咽鳞癌CNE-1细胞的获得性耐药;X射线照射后鼻咽鳞癌CNE-1细胞的耐药基因和耐药蛋白呈现先增高后缓慢回落的趋势。