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实验目的:探讨mi RNA对高脂膳食诱导的肥胖大鼠生精细胞凋亡的调控,并初步揭示有氧运动对雄性高脂膳食大鼠生精细胞凋亡的mi RNA干预作用。实验方法:将48只雄性健康SD大鼠随机分为4组:普通膳食对照组（A）、高脂膳食组（B）、普通膳食+运动组（C）、高脂膳食+运动组（D）,每组各12只;A组和C组,普通饲料喂养;B组和D组,高脂、高热量饲料喂养。C组及D组大鼠进行10周60min无负重游泳运动,每周6天。实验结束后,各组大鼠数量为A组8只,B组11只,C组10只,D组11,测量大鼠体重及睾周脂重。将A组大鼠分为A01、A02、A03三组;B组大鼠分为B01、B02、B03三组;C组大鼠分为C01、C02、C03三组;D组大鼠分为D01、D02、D03三组,对其进行文库构建,共构建12组cDNA文库,利用Solexa高通量测序技术结合生物信息分析鉴定mi RNA并进行差异表达谱的分析,进一步选择部分差异mi RNA,分析其生物学功能。实验结果:1.通过Solexa测序技术,成功构建了大鼠的基因文库,经检测得到每组高质量的纯净序列（Clean Data）均大于20M,均占原始数据87%以上,Q30均在95%以上。对文库中的纯净序列进行了分类注释,获得包含mi RNA的Unannotated reads。并将小RNA的纯净序列定位到大鼠的基因组,以备后续的研究。2.通过生物学分析,从A组、B组、C组、D组四组睾丸组织中共鉴定出464个mi RNA,其中315个为已知mi RNA和149个为新的mi RNA。根据|log2（FC）|≥1进行文库测序的mi RNA差异表达分析显示:B组对A组差异表达显著mi RNA有27个,其中3个上调,24个下调。C组对A组差异表达mi RNA有11个,其中0个上调,11个下调。D组对A组差异表达mi RNA有62个,其中37个上调,25个下调。3.根据|log2（FC）|≥1重点分析A与B组mi RNA的表达差异,B组对A组差异表达mi RNA有27个,其中3个上调,24个下调,共预测到19612个靶基因,其中24个下调mi RNAs为:rno-miR-101a-5p,57 个;rno-miR-101a-3p,4 个;rno-miR-135b-3p,465 个等;3 个上调 miRNAs:rno-miR-130b-5p,164 个;rno-miR-346,2963 个;unconservative63922464,3220 个。4.GO分类可知,对照组A组和高脂膳食组B组存在差异的mi RNA基因,其对应的靶基因在代谢方面、生殖方面、细胞死亡、免疫系统等方面均有所表达;在KEGG通路中分类可知,差异表达 mi RNA 靶基因在 Pathways in cancer、MAPK signaling pathway、Wnt signaling pathway、Axon guidance、Apoptosis 等方面均表达。5.通过与NR、Swiss-Prot、Pfam数据库比对,获得与有性生殖有关的miRNA有:rno-miR-6328;rno-miR-196b-5p;rno-miR-346;unconservative63922464;rno-miR-503-5p。与细胞凋亡有关的 mi RNA 有:rno-miR-6328;rno-miR-3075;rno-miR-346;rno-miR-130b-5p;rno-miR-205;rno-miR-31a-5p;rno-miR-503-5p;unconservative1540112;unconservative6<sub>3922464。进一步发现,以上mi RNA通过Bcl、Bax两个途径进行生精细胞凋亡的。结论:1.本实验通过高通量测序方法成功获得普通膳食大鼠、高脂膳食大鼠、普通运动组和高脂运动组睾丸的mi RNA的cDNA文库。首次对大鼠睾丸组织进行了 micro RNA组学分析,共鉴定出464个mi RNA,其中315个为已知mi RNA和149个为新的mi RNA。2.较多的mi RNA在高脂膳食的大鼠睾丸中呈下调趋势,进行有氧干预后,普通组较多的mi RNA呈上调,总之,差异的mi RNA,都在有氧运动后发生表达量的改变,使其生物学功能发生改变。3.通过GO、KEGG通路中分类可知,对照组A组和高脂膳食组B组差异的mi RNA基因,与有性生殖、细胞死亡等有关。4.通过与NR、Swiss-Prot、Pfam数据库比对,我们认为高脂膳食引起肥胖的大鼠生殖细胞通过 Bcl、Bax 途径凋亡有关的 mi RNA 有:mo-miR-6328;rno-miR-3075;rno-miR-130b-5p;rno-miR-346;rno-miR-503-5p;mo-miR-205;rno-miR-31a-5p;unconservative63922464;unconservative1540112;与有性生殖有关的 mi RNA 有:unconservative63922464;rno-miR-196b-5p;mo-miR-6328;rno-miR-346;rno-miR-503-5p;而进行有氧运动干预,可以改变这些差异基因的表达量,起到了有效的改善生精细胞调亡情况。证明有氧运动是改善男性不育的有效方法之一。