越橘(Blueberry)是经济价值很高的一种水果,属杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium Sp.)植物。中国野生越橘主要分布在大兴安岭北部(黑龙江、内蒙古)、吉林长白山。越橘果中含有大量的营养物质,其中花青素(Anthocyanidin)是越橘果实中大量存在的一种黄烷醇类多酚类化合物,具有抗氧化、抗炎症、促进视紫红质合成、提高免疫力、抗癌等多种生理功能,具有很高的开发利用价值。原花青素主要由黄烷醇中的单体(+)—儿茶素[(+)-catechin,C],(-)一表儿茶素[(-)-epicatechin,EC]和(-)一表儿茶素没食子酸酯[(-)-epicatechin-3-O-gallate,ECG]聚合而成,其最高平均聚合度达十五聚体。通常将二至四聚体称为低聚体(procyanidolic oligomers.简称OPC或PCO),将五聚体以上的称为高聚体(procyanidolic polymers,简称PPC)。花青素各单元间连接主要由C4-C6和C4-C8 2种方式,由于单体的构象或键合位置的不同,可有多种异构体,且各聚合体和同聚异构体之间极性相近。本研究以新鲜干净的野生越橘果经匀浆破碎、离心分离出来的果渣为原料,用预冷的丙酮提取越橘原花青素,其最佳提取工艺参数为提取温度4℃,提取溶剂75%丙酮,料液比1:3(V:V),提取时间1 h。反应液离心收集上清,过滤、真空浓缩至丙酮全部蒸出,回收的丙酮可重复利用,浓缩液经混合非极性溶剂萃取后,即得越橘原花青素上柱液。HP-2MG型大孔吸附树脂对越橘原花青素的纯化效果最好,吸附率90.8%,解吸率96.0%。大孔吸附树脂湿法装柱,预处理后备用。在浓缩萃取液上柱前,先将柱子用通入氮气的脱氧水洗脱1~2个体积,以排除柱中氧气,防止越橘原花青素被氧化,且将柱子用锡箔纸包裹,达到避光效果。上柱至大孔树脂吸附饱和,再用通入氮气的脱氧水冲洗至冲洗液无明显颜色。然后再用10%—50%—75%—95%乙醇进行冲洗,各浓度乙醇pH3~6,且保持通入氮气,以保持体系的稳定性。以0.5~4个柱体积/小时的速度洗脱,收集洗脱液。洗脱液颜色很浅时,停止上柱,记录各洗脱液体积。将收集到的10%、50%、75%、95%的洗脱液用旋转蒸发仪进行浓缩;将浓缩液冷冻干燥,程序为:用香草醛法测得其总黄烷醇含量为95%,其得率为0.72%。采用反相高效液相色谱法和电喷雾质谱法对中国野生笃斯越橘中花青素组分进行分离和分析。经HP-2MG型大孔吸附树脂柱层析得到越橘花青素样品溶液,采用Alltima C18反相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以2 %甲酸水溶液(A)和2 %甲酸/甲醇溶液(B)作为流动相,分2个梯度对花青素组分进行洗脱,将其主要洗脱峰在电喷雾正离子模式下进行分析,根据质谱的准分子离子[M+H](m / z)检测其聚合度。结果表明野生越橘花青素的提取物被展开成8个主要的洗脱峰,以峰面积计算,主要洗脱峰总含量达85%。经质谱分析,其中4号峰、8号峰、12号峰的质谱及碎片信息表明,它们是原花青素单体,6号峰、10号峰的质谱及碎片信息表明,它们是原花青素二聚体,7号峰的质谱及碎片信息表明,它们是原花青素三聚体,13号峰和14号峰的质谱及碎片信息表明,它们是原花青素四聚体。结果表明我国野生笃斯越橘中含有较丰富的花青素,低聚体是其中的主要成分。本实验结果为进一步研究我国大兴安岭野生笃斯越橘花青素的组成情况提供了依据,对于开展其后续的结构、功能、质量检测以及生产开发研究都具有一定的参考价值.为进一步研究越橘原花青素的性质,本研究以本实验室制备的越橘原花青素单体——儿茶素与表儿茶素的混合物(记为PCM组)、越橘原花青素的二聚体各异构体的混合物(记为PCD组)、聚合度>2的越橘原花青素混合物(记为PCT组)为研究对象,对越橘原花青素做还原能力的测定。实验结果表明:随着越橘原花青素聚合度的相对平均分子质量降低和相对分子质量分布变窄,其还原能力增强即PCM<PCT<PCD。同时采用亚油酸体系、对超氧阴离子自由基02-·的清除以及对羟基自由基HO·的清除作用的实验来研究越橘原花青素的抗氧化活性,结果表明:在亚油酸体系中,越橘原花青素的抗氧化活性高于Vc和VE,并且随着浓度的增加其抗氧化能力与合成抗氧化剂BHT相近。越橘原花青素对清除超氧阴离子自由基及清除羟自由基的能力强于葡萄籽原花青素和Vc。